兔骨髓間充質干細胞的生物學特性及用于大段骨缺損修復的實驗研究.pdf

1、該研究采用兔大段骨缺損動物模型,探討骨髓MSCs作為種子細胞在骨組織工程領域中的應用.參考人骨髓MSCs分離培養(yǎng)方法,我們將兔骨髓細胞經過密度為1.073g/ml的Percoll分離液分離骨髓單個核細胞,用含10﹪篩選血清的低糖DMEM進行培養(yǎng).隨后的實驗結果證明,用這種方法分離的MSCs的形態(tài)與人骨髓MSCs相似,呈紡錘型貼壁生長;體外培養(yǎng)細胞倍增時間為20小時左右,說明其增殖較快;組織化學染色結果顯示,所分離的兔MSCs細胞化學特征

2、為糖原強陽性(PAS),部分細胞堿性磷酸酶(ALP)陽性(陽性率約5﹪),蘇丹黑陰性(SB),酸性醋酸酯酶(ANAE)弱陽性,非特異性脂酶(NSE)陰性;細胞周期分析表明,G0/G1、S和G2M所占比例分別為84.56﹪,3.26﹪和12.18﹪.結果提示體外培養(yǎng)的MSCs具有典型的干細胞增殖特點,即只有少數細胞處于活躍的增殖期,大部分的細胞處于靜息期.我們通過合適的方法,制成聚DL-乳酸/磷酸三鈣/I型膠原復合物,其性能上互相取長補短

3、,將TCP引入聚DL-乳酸可改善聚DL-乳酸機械性能差,降解速度快,骨結合力弱等缺點.將I型膠原引入基質材料可顯著提高材料與組織細胞的相互作用,利于細胞黏附.該研究所分離的兔BMSCs接種于PDLLA/TCP后的掃描電鏡結果顯示,MSCs不僅黏附于材料表面,而且能夠移行入三維支架材料內部,說明我們所設計材料的孔徑及孔隙率較為合適,在移植于動物體內后這種結構可提供寬大的表面積和空間,利于細胞粘附生長,細胞外基質沉積,營養(yǎng)和氧氣進入,代謝物

4、產出,也有利于血管和神經長入.在動物體內骨缺損修復研究部分,該研究采用了大段骨缺損模型(1.5cm),同時設計了三個實驗組.A組為材料復合細胞組;B組只用材料而不加細胞;C組為空白對照組,即無細胞無材料組.為進一步研究MSCs在體內的成骨過程,我們對MSCs體內骨組織修復過程進行了連續(xù)的組織學觀察.發(fā)現2周時細胞復合材料組即有成骨細胞形成及胞外基質分泌,8周時可見新生血管形成,12周時出現部分類骨結構.電鏡切片觀察也獲得了相近的結果.提