同種異體肝細胞移植對大鼠肝臟纖維化的影響.pdf

1、目的：在動物試驗及臨床研究中，同種異體肝細胞移植(Hepatocyte Transplantation，HTx)已經(jīng)被證實對許多肝病的治療有效。其可以促進肝臟的再生、糾正肝臟代謝性疾病、并能延長急性肝功能衰竭動物的生存期。為了擴大肝細胞移植的適應癥，深入對其機制的認識，本研究采用動物實驗方法探討了HTx對肝臟最常見的病理類型——肝纖維化的影響。 研究方法：本研究以肝纖維化大鼠為研究對象，將長效示蹤劑CM-DiI標記的新鮮異體肝細

2、胞經(jīng)脾臟移植入受體大鼠的肝臟內(nèi)。于術后1，2，7，14天收集肝臟及無血小板血漿標本。對肝臟標本的分析，本研究應用非線性光學激光共聚焦顯微鏡技術。該方法能夠在不染色的前提下對肝臟切片標本中的膠原纖維進行靈敏客觀的成像。結(jié)合免疫熒光染色及應用不同波長的激發(fā)激光，本研究對同一標本的肝細胞、膠原纖維、肝星形細胞活性、移植細胞的植入情況同時進行觀察。由該方法得到的肝內(nèi)膠原分布圖應用計算機輔助的定量分析技術進行定量。由于在肝臟受到損傷時，肝星形細胞

3、(hepatic stellate cell，HSCs)的激活及轉(zhuǎn)化生長因子－β1(TGF-β1)的異常升高被認為是肝纖維化的關鍵步驟，因此本實驗在機制方面重點研究了HTx對纖維化肝臟內(nèi)的肝星形細胞活性、外周血中TGF-β1和與其激活及清除相關的蛋白纖溶酶和α2－巨球蛋白(α2-M)血漿水平的改變。 結(jié)果：四氯化碳(CCl<,4>)間斷腹腔注射21天后大鼠肝內(nèi)纖維化面積百分比為12.22±1.11％，比3天(2.36±0.31％

4、)及14天(6.12±0.37％)者明顯升高，P<0.01。接收肝細胞移植后.的第14天，大鼠肝臟內(nèi)成膠原纖維面積百分比為3.69±0.44％，顯著低于自行恢復組(8.25±0.69％)。經(jīng)過對活性肝星形細胞的免疫熒光染色及定量統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)接受肝細胞移植的大鼠肝臟較同期未接受肝細胞移植者活性肝星形細胞減少了6倍之多，P<0.01。血漿學檢查發(fā)現(xiàn)：肝纖維化大鼠血漿中的總TGF-β1和活性TGF-β1濃度較正常大鼠明顯升高，P<0.05。

5、在接受肝細胞移植術后第一天，血漿中的TGF-β1顯著降低，P<0.01。另外，肝臟纖維化大鼠血漿內(nèi)的纖溶酶水平較正常者為高(5.16±0.42μg/ml vs．1.95±0.22μg/ml，P<0.01)，接受移植后水平顯著下降。α2巨球蛋白水平在肝纖維化大鼠血漿內(nèi)的水平較正常者顯著升高(152.4±27.6 mg/ml vs．18.1±2.5 mg/ml，P<0.01)，接受肝細胞移植后也發(fā)生了顯著變化。 結(jié)論：1．同種異體肝