氟斑牙流行病學調查及其與CFTR基因多態(tài)性相關性研究.pdf

1、地方性氟中毒（endemicfluorosis），是主要侵犯骨骼（氟骨癥）、牙齒（氟斑牙）的環(huán)境地球化學性地方病。它是人類長期生活于高氟環(huán)境中，吸入高氟污染的空氣或攝入氟含量較高的食物及飲水而導致的全身慢性蓄積性中毒。陜西省局部地區(qū)屬于氟含量過高的病區(qū)。本課題組對安康地區(qū)氟中毒情況進行流行病學調查，重點關注病區(qū)飲用水氟含量及氟斑牙臨床表現(xiàn)和發(fā)病情況；在初步了解氟離子進出細胞途徑和致病機制的基礎上，進一步探討不同個體對相同高氟環(huán)境產(chǎn)生不同

2、反應的基因因素，分析氯離子通道基因的多態(tài)性與氟敏感性的聯(lián)系，找尋氯離子通道基因作為氟敏感基因的可能性，從遺傳學角度審視“地方性氟斑牙”這一傳統(tǒng)意義上的地方病。
　　本實驗首先以問卷調查及臨床檢查的形式對安康地區(qū)所轄蒿坪、流水兩鎮(zhèn)分別進行氟斑牙的流行病學調查，并對當?shù)鼗疾∏闆r進行統(tǒng)計學分析；然后，獲取調查人群的基因組DNA（deoxyribonucleicacid），選擇囊性纖維化跨膜傳導調節(jié)因子（cysticfibrosistra

3、nsmembraneconductanceregulator，CFTR）作為目的基因進行相應的多態(tài)性位點檢測；最后，將檢測所獲的基因多態(tài)性結果進行生物信息學分析、比較。主要研究內容如下：
　　第一部分：分別于安康地區(qū)蒿坪、流水兩鎮(zhèn)兩所中小學隨機抽取10-22歲青少年納入調查范圍，通過問卷調查的形式記錄患者的年齡、身高、體重、居住地等一般信息；根據(jù)《Dean氏氟斑牙臨床診斷標準和分度法》進行口腔臨床檢查及氟斑牙診斷分型并記錄檢查結果

4、；采集受檢對象全血以獲其基因組DNA，同時留取主要飲用水水源樣本以檢測水氟含量；后期根據(jù)采集所獲信息及臨床檢查結果統(tǒng)計該地氟斑牙患病率。
　　第二部分：采用《水質氟化物的測定——茜素磺酸鋯目視比色法》對當?shù)仫嬘盟x子濃度進行測定。
　　第三部分：從受檢者全血中抽提基因組DNA進行聚合酶鏈式反應（polymerasechainreaction，PCR)擴增，采用酶切技術和連接酶鏈反應（ligasechainreaction，

5、LCR）兩種方法對CFTR基因的單核苷酸多態(tài)性位點（singlenucleotidepolymorphism，SNP）M470V進行檢測以確定基因分型并進行統(tǒng)計學分析。
　　第四部分：利用受檢者基因組DNA進行PCR擴增，針對TG-repeat和Poly-T兩個SNP位點進行基因測序（DNAsequencing）以確定其基因分型并進行統(tǒng)計學分析。將三個SNP位點檢測結果綜合進行基因分型，統(tǒng)計不同基因型分布情況；同時比較氟斑牙患者與

6、正常對照之間、不同氟斑牙病變程度之間以及不同地域之間的基因分布情況，以了解CFTR基因多態(tài)性與氟斑牙患病情況之間的相關性。
　　主要研究結果如下：
　　1.記錄信息完整并獲得血樣的受檢例數(shù)達720，其中久居病區(qū)者達681例。病區(qū)共檢出628例氟斑牙患者，平均患病率為92.22％；
　　2.蒿坪、流水兩鎮(zhèn)飲用水氟含量分別為0.38mg/L和0.98mg/L，均未超過國家水質氟離子標準（≤1.0mg/L）；
　　3.

7、調查氟斑牙患者中基因型分布比例依次為MV型（78.54％）、VV型（18.63％）、MM型（2.83％），V470為主要的單倍體型；
　　4.調查氟斑牙患者中Poly-T多態(tài)性位點有T5/T7、T7/T7、T7/T9、T9/T9四種基因型，其中T7/T9為主要基因型，T7為最常見的單倍體形式；
　　5.將兩地所有調查對象多態(tài)性位點基因型按照病變程度進行綜合比較發(fā)現(xiàn)，MV7-11/7-11、MV7-11/9-10、VV7-11

8、/9-10為三種常見基因型。
　　本研究得出以下結論：
　　1.隨年齡增長氟斑牙患病率呈上升趨勢，且病變程度隨之加重；
　　2.蒿坪、流水兩鎮(zhèn)飲用水氟含量均尚未超過國家水質氟離子標準；
　　3.低分布的MM基因型與當?shù)馗叻哐阑疾÷蚀嬖谝欢ǖ南嚓P性；
　　4.調查人群中MV7-11/7-11基因型分布隨病變程度加重呈上升趨勢。
　　本研究針對氟斑牙這一傳統(tǒng)意義上的地方病進行了大樣本的分子流行病學研究，