氟斑牙流行病學(xué)調(diào)查及其與CFTR基因多態(tài)性相關(guān)性研究.pdf

1、地方性氟中毒（endemicfluorosis），是主要侵犯骨骼（氟骨癥）、牙齒（氟斑牙）的環(huán)境地球化學(xué)性地方病。它是人類(lèi)長(zhǎng)期生活于高氟環(huán)境中，吸入高氟污染的空氣或攝入氟含量較高的食物及飲水而導(dǎo)致的全身慢性蓄積性中毒。陜西省局部地區(qū)屬于氟含量過(guò)高的病區(qū)。本課題組對(duì)安康地區(qū)氟中毒情況進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，重點(diǎn)關(guān)注病區(qū)飲用水氟含量及氟斑牙臨床表現(xiàn)和發(fā)病情況；在初步了解氟離子進(jìn)出細(xì)胞途徑和致病機(jī)制的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討不同個(gè)體對(duì)相同高氟環(huán)境產(chǎn)生不同

2、反應(yīng)的基因因素，分析氯離子通道基因的多態(tài)性與氟敏感性的聯(lián)系，找尋氯離子通道基因作為氟敏感基因的可能性，從遺傳學(xué)角度審視“地方性氟斑牙”這一傳統(tǒng)意義上的地方病。
　　本實(shí)驗(yàn)首先以問(wèn)卷調(diào)查及臨床檢查的形式對(duì)安康地區(qū)所轄蒿坪、流水兩鎮(zhèn)分別進(jìn)行氟斑牙的流行病學(xué)調(diào)查，并對(duì)當(dāng)?shù)鼗疾∏闆r進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；然后，獲取調(diào)查人群的基因組DNA（deoxyribonucleicacid），選擇囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子（cysticfibrosistra

3、nsmembraneconductanceregulator，CFTR）作為目的基因進(jìn)行相應(yīng)的多態(tài)性位點(diǎn)檢測(cè)；最后，將檢測(cè)所獲的基因多態(tài)性結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析、比較。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　第一部分：分別于安康地區(qū)蒿坪、流水兩鎮(zhèn)兩所中小學(xué)隨機(jī)抽取10-22歲青少年納入調(diào)查范圍，通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查的形式記錄患者的年齡、身高、體重、居住地等一般信息；根據(jù)《Dean氏氟斑牙臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)和分度法》進(jìn)行口腔臨床檢查及氟斑牙診斷分型并記錄檢查結(jié)果

4、；采集受檢對(duì)象全血以獲其基因組DNA，同時(shí)留取主要飲用水水源樣本以檢測(cè)水氟含量；后期根據(jù)采集所獲信息及臨床檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)該地氟斑牙患病率。
　　第二部分：采用《水質(zhì)氟化物的測(cè)定——茜素磺酸鋯目視比色法》對(duì)當(dāng)?shù)仫嬘盟x子濃度進(jìn)行測(cè)定。
　　第三部分：從受檢者全血中抽提基因組DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasechainreaction，PCR)擴(kuò)增，采用酶切技術(shù)和連接酶鏈反應(yīng)（ligasechainreaction，

5、LCR）兩種方法對(duì)CFTR基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（singlenucleotidepolymorphism，SNP）M470V進(jìn)行檢測(cè)以確定基因分型并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　第四部分：利用受檢者基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，針對(duì)TG-repeat和Poly-T兩個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因測(cè)序（DNAsequencing）以確定其基因分型并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。將三個(gè)SNP位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果綜合進(jìn)行基因分型，統(tǒng)計(jì)不同基因型分布情況；同時(shí)比較氟斑牙患者與

6、正常對(duì)照之間、不同氟斑牙病變程度之間以及不同地域之間的基因分布情況，以了解CFTR基因多態(tài)性與氟斑牙患病情況之間的相關(guān)性。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　1.記錄信息完整并獲得血樣的受檢例數(shù)達(dá)720，其中久居病區(qū)者達(dá)681例。病區(qū)共檢出628例氟斑牙患者，平均患病率為92.22％；
　　2.蒿坪、流水兩鎮(zhèn)飲用水氟含量分別為0.38mg/L和0.98mg/L，均未超過(guò)國(guó)家水質(zhì)氟離子標(biāo)準(zhǔn)（≤1.0mg/L）；
　　3.

7、調(diào)查氟斑牙患者中基因型分布比例依次為MV型（78.54％）、VV型（18.63％）、MM型（2.83％），V470為主要的單倍體型；
　　4.調(diào)查氟斑牙患者中Poly-T多態(tài)性位點(diǎn)有T5/T7、T7/T7、T7/T9、T9/T9四種基因型，其中T7/T9為主要基因型，T7為最常見(jiàn)的單倍體形式；
　　5.將兩地所有調(diào)查對(duì)象多態(tài)性位點(diǎn)基因型按照病變程度進(jìn)行綜合比較發(fā)現(xiàn)，MV7-11/7-11、MV7-11/9-10、VV7-11

8、/9-10為三種常見(jiàn)基因型。
　　本研究得出以下結(jié)論：
　　1.隨年齡增長(zhǎng)氟斑牙患病率呈上升趨勢(shì)，且病變程度隨之加重；
　　2.蒿坪、流水兩鎮(zhèn)飲用水氟含量均尚未超過(guò)國(guó)家水質(zhì)氟離子標(biāo)準(zhǔn)；
　　3.低分布的MM基因型與當(dāng)?shù)馗叻哐阑疾÷蚀嬖谝欢ǖ南嚓P(guān)性；
　　4.調(diào)查人群中MV7-11/7-11基因型分布隨病變程度加重呈上升趨勢(shì)。
　　本研究針對(duì)氟斑牙這一傳統(tǒng)意義上的地方病進(jìn)行了大樣本的分子流行病學(xué)研究，