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文檔簡介
1、目的:
從噬菌體隨機(jī)15肽庫篩選血型A抗原模擬表位,并對其進(jìn)行鑒定。
方法:
1.采用噬菌體展示技術(shù),以抗A抗體作為靶分子,對噬菌體隨機(jī)15肽庫連續(xù)進(jìn)行四輪篩選。
2.從第4輪洗脫物滴定平板隨機(jī)挑選單克隆噬菌體擴(kuò)增,通過ELISA的方法,對單克隆噬菌體與抗A抗體的結(jié)合進(jìn)行初步鑒定。
3.根據(jù)ELISA初步鑒定結(jié)果,選取陽性克隆擴(kuò)增提取DNA測序。
4.參
2、照測序結(jié)果,選取相應(yīng)的噬菌體克隆,通過梯度ELISA,和紅細(xì)胞抑制試驗(yàn)進(jìn)一步鑒定噬菌體克隆與抗A的結(jié)合。
5.最后通過Autodock軟件分析多肽序列與抗A抗體的對接效果。
結(jié)果:
1.通過四輪篩選,產(chǎn)出/投入比逐漸上升,總富集率達(dá)到1600倍。ELISA方法初步鑒定,37個(gè)隨機(jī)噬菌體單克隆中,11個(gè)陽性克隆,陽性率達(dá)到27.5%。
2.陽性克隆提取DNA測序,11個(gè)單克隆中有9個(gè)
3、為同一序列TRWLVYFSRPYLVAT。
3.梯度ELISA鑒定,clone8隨著稀釋倍數(shù)的增加,clone8 濃度的降低,吸光度逐漸降低,對照組則不呈相關(guān)性。同時(shí)紅細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)clone8對紅細(xì)胞凝集的抑制效果呈濃度依賴性。
4.生物軟件分析,得到的多肽序列剛好嵌入抗A抗體上高變區(qū)的凹槽,與天然A抗原對接與A抗體上的同一位置。
結(jié)論:
通過四輪篩選富集的多肽序列,經(jīng)過
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