一種新的人NK細(xì)胞系的建立、特征及抗腫瘤效應(yīng)研究.pdf

1、中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文一種新的人NK細(xì)胞系的建立、特征及抗腫瘤效應(yīng)研究姓名：程民申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：田志剛20100401摘要II細(xì)胞系體外培養(yǎng)352天，凍存后復(fù)蘇繼續(xù)培養(yǎng)180天以上，細(xì)胞形態(tài)及性狀穩(wěn)定。NKG細(xì)胞為大顆粒淋巴細(xì)胞，體外培養(yǎng)倍增時(shí)間為23天。2.NKG細(xì)胞的表型及功能分子的表達(dá)細(xì)胞的表型及功能分子的表達(dá)NKG細(xì)胞的表型鑒定為CD56CD16CD27CD3αβTCRγδTCRCD4CD8CD

2、19CD161CD45。NKG細(xì)胞表面表達(dá)高水平CD2、CD58、CD11a、CD54、CD11b及CD11c等粘附分子；高表達(dá)共刺激分子CD48。NKG細(xì)胞表面表達(dá)抑制性受體CD94NKG2A、CD158b和CD85j，同時(shí)亦表達(dá)高水平NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D和NKG2C等活化性受體。另外，與細(xì)胞殺傷功能相關(guān)的TRAIL、FasL、granzymeB、perfin和IFNγ等均在ΝΚG細(xì)胞中表達(dá)。上述結(jié)果表明，Ν

3、ΚG細(xì)胞具有活化性NK細(xì)胞的特征。3.NKG細(xì)胞的抗腫瘤細(xì)胞毒活性及其分子機(jī)制細(xì)胞的抗腫瘤細(xì)胞毒活性及其分子機(jī)制NKG細(xì)胞對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系均有較強(qiáng)的殺傷活性，尤其是對(duì)SGC7901和Ho8910細(xì)胞的殺傷活性80%（ET=201）。與NK92、NKL及YT細(xì)胞相比，NKG細(xì)胞對(duì)Ho8910細(xì)胞的殺傷活性明顯增強(qiáng)。體外抗體阻斷及中和實(shí)驗(yàn)表明NKG細(xì)胞的細(xì)胞毒活性主要依賴于NKG2D和NKp30識(shí)別機(jī)制。當(dāng)γ輻照劑量達(dá)800cGY時(shí)，輻照后

4、的NKG細(xì)胞失去增殖能力，但在48小時(shí)內(nèi)維持其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明800cGY輻照后的NKG細(xì)胞對(duì)原代分離的人卵巢癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的殺傷活性(75%~45%ET=201)。4.人卵巢癌小鼠模型中人卵巢癌小鼠模型中NKG細(xì)胞的免疫治療作用細(xì)胞的免疫治療作用利用Ho8910細(xì)胞腹腔注射的方式接種裸鼠，成功建立人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型。當(dāng)將800cGY輻照后的NKG細(xì)胞與Ho8910細(xì)胞按5：1混合后接種裸鼠，結(jié)果顯示小鼠成瘤

5、時(shí)間由28~44天延遲至90~135天，成瘤率由100%明顯降低至50%。NKG細(xì)胞治療組小鼠腹圍明顯減少，盡管在觀察時(shí)間內(nèi)50%小鼠死亡，但其平均生存時(shí)間由61.5天明顯延長(zhǎng)至210.2天。以上結(jié)果表明NKG細(xì)胞在小鼠體內(nèi)對(duì)人卵巢癌細(xì)胞具有明顯的殺傷功能。當(dāng)在Ho8910細(xì)胞接種后第21天，給予800cGY輻照后的NKG細(xì)胞進(jìn)行治療，結(jié)果表明治療組小鼠成瘤時(shí)間由28~38天延后至56~66天，小鼠成瘤率由100%降低至62.5%，成瘤