αD-,3-對老年雄性大鼠頜骨、股骨RANK-RANKL-OPG的影響.pdf

1、研究背景：
　　 骨質疏松癥[osteoprosis,(op)]是一種以骨量減少骨的微結構破壞為特征的全身性骨骼疾病，伴有脆性減少，容易發(fā)生骨折。RANK/RANKL/OPG系統(tǒng)被認為是破骨細胞分化成熟最重要的信號通路，是四肢骨發(fā)生OP最根本的原因。
　　 但該通路是否同樣啟動了口腔頜面部的OP，以及他們與牙槽骨骨量、骨密度的關系如何，尚未見文獻報道。女性由于絕經(jīng)后雌激素缺乏更易發(fā)生OP而受到更多關注，但是隨著老年社會的

2、到來，男性OP發(fā)病率逐漸升高，老年男性OP日益成為嚴重的世界性問題。雄激素缺乏是男性OP發(fā)生重要原因，但雄激素與口腔頜面部骨密度、骨量的關系如何未見報道。雄激素對頜骨RANK/RANKL/OPG系統(tǒng)mRNA的表達的影響是否與股骨一致，也不清楚?？谇活M面部骨質疏松造成面容塌陷，牙易松動脫落，牙槽骨萎縮，嚴重影響患者咀嚼、發(fā)音和美觀功能。即使采用義齒修復也因缺乏足夠的骨組織支持導致修復失敗，尋找藥物治療的方法減緩骨的吸收增加骨量一直是臨床上

3、迫切需要解決的問題。而αD3作為骨質疏松的基礎用藥，它對RANK/RANKL/OPG的影響如何？我們可否把它用于男性口腔頜面部牙槽骨OP的防治？
　　 因此有必要建立自然衰老的雄性大鼠模型闡述雄激素的改變對口腔頜面部骨骼骨密度、骨形態(tài)計量的影響，及RANK/RANKL/OPG信號途徑是否啟動口腔頜面部OP，評價αD3對老年大鼠頜骨RANK/RANKL/OPG表達的影響及骨量、骨密度的作用。
　　 第一章 RANKL、OP

4、G在不同年齡男性下頜骨的表達
　　 目的：觀察RANKL、OPG在不同年齡男性下頜骨的表達
　　 方法：選用湘雅醫(yī)院2008.5-2009.7口腔門診拔牙去骨及病房正頜外科手術男性病人46例。排除牙周病、影響骨代謝的全身系統(tǒng)疾病及藥物服用史，無抽煙、酗酒不良生活習慣。分為3組，其中青少年組10-29歲，17人，中年組30-59歲，15人，老年組60-89歲，14人。采用RT-PCR方法，觀察下頜骨RANKL、OPG的表達

5、。
　　 結果：
　　 1、與青少年組相比，中年組和老年組RANKL mRNA分別升高2.1倍和5.3倍，OPGmRNA分別升高3.3倍和4.8倍，差異有顯著性(p＜0.05)。
　　 2、RANKL和OPG值與年齡正相關。
　　 結論：
　　 1、男性下頜骨RANKL mRNA和OPG mRNA水平隨年齡明顯升高，RANKL和OPG值與年齡正相關。
　　 2、中年組頜骨改建活躍，與青少年

6、組相比，骨形成大于骨吸收；
　　 3、老年組頜骨吸收與骨形成均處與低水平，骨吸收大于骨形成。
　　 第二章αD3對老年大鼠生化指標、骨密度、骨形態(tài)計量的影響
　　 目的：通過觀察不同月齡大鼠生化指標、骨密度及骨形態(tài)計量的變化，研究雄激素的改變對大鼠的作用及αD3對老年大鼠的影響。方法：選用6周齡、6月齡、24月齡、24月齡＋αD3組Wistar大鼠分為甲、乙、丙、丁組四組，每組15只。其中丁組為24月齡＋αD3組

7、，按0.05ug/kg/d－1灌胃，隔天一次，每周3次，連續(xù)10周。生化指標測定：頸總動脈取血分離上層血清測ALP、BGP、T、TRACP5b；采用雙能X線測定右側股骨、頜骨骨密度；骨形態(tài)計量：采用右側股骨、頜骨EDTA脫鈣，在Motic image advanced6.0型圖像系統(tǒng)測量骨小梁面積、骨小梁厚度、骨小梁間距等。
　　 結果：
　　 生化指標：
　　 1、T水平隨月齡增長明顯下降，但組間差異無顯著性(

8、p＞0.05)；
　　 2、ALP、BGP隨月齡增長明顯下降。與6周相比，6月齡、24月齡、24月＋αD3組差異有顯著性(p＜0.05)；
　　 3、TRACP5b水平隨月齡增長明顯升高，24月及24月＋αD3較6月組差異有顯著性(p＜0.05)；
　　 4、BGP與ALP正相關(r＝0.58)，與TRACP5b負相關(r＝－0.49)。
　　 5、Ca、P變化不大，各組間差異無顯著性(p＞0.05)。<

9、br>　　 骨密度指標：
　　 1、股骨、頜骨骨密度隨著月齡增長增加；
　　 2、24月＋αD3較24月組骨密度有增加，但差異無顯著性(p＞0.05)。
　　 骨形態(tài)計量指標：
　　 1、股骨、頜骨隨月齡增長，骨小梁面積、寬度增加；
　　 2、與6周組頜骨破骨細胞計數(shù)相比，6月齡、24月齡、24月＋αD3組差異有顯著性(p＜0.05)；與6月組股骨破骨細胞計數(shù)比，6周組、24月齡、24月＋αD3

10、組差異有顯著性(p＜0.05)；
　　 3、頜骨24月組較6月組比較，骨小梁寬度增加53％，但骨小梁間隔增加123％；
　　 4、24月＋αD3組較24月齡頜骨骨小梁面積增加33％。
　　 結論：
　　 1、隨月齡增長睪酮水平明顯下降。
　　 2、隨月齡增長骨形成生化指標也明顯下降，骨吸收指標明顯升高。
　　 3、骨吸收與骨形成在老年組處于低水平。
　　 4、藥物αD3有促進頜骨骨

11、量的作用。
　　 第三章αD3對老年大鼠頜骨、股骨RANK/RANKL/OPG的影響
　　 目的：觀察RANK/RANKL/OPG在不同月齡大鼠股骨、頜骨的表達，探討頜骨骨質疏松與全身骨質疏松的一致性。探討αD3對老年大鼠RANKLmRNA及OPGmRNA表達的影響。
　　 方法：選用6周齡、6月齡、24月齡、24月齡＋αD3組Wistar大鼠分為甲、乙、丙、丁四組，每組15只。其中丁組為24月齡＋αD3組，按0

12、.05ug/kg/d－1灌胃，隔天一次，每周3次。連續(xù)10周。取左側股骨遠中干骺端1/2和左側磨牙段下頜骨采用RT-PCR測RANKL及OPG的mRNA的表達并免疫組化分析。
　　 結果：
　　 股骨RT-PCR的結果：
　　 1、RANKL mRNA值隨月齡增長明顯。與6周組相比，6月和24月組RANKLmRNA分別增加6.0倍和7.3倍，組間差異有顯著性(p＜0.05)，OPGmRNA值隨月齡逐步增加，組間差

13、異無顯著性(p＞0.05)；
　　 2、24月＋αD3組與24月組比較RANKL mRNA和OPG mRNA升高，但差異無顯著性(p＞0.05)；RANK明顯降低，差異有顯著性(p＜0.05)。
　　 3、RANKL/OPG值隨月齡增長明顯升高，6月、24月組與6周組比較，差異有顯著性(p＜0.05)。
　　 頜骨RT-PCR的結果：
　　 1、頜骨RANKL mRNA隨月齡增長升高，與6周組相比，6月齡

14、和24月齡RANKLmRNA分別增加6.2倍和6.4倍，組間差異有顯著性(p＜0.05)；
　　 2、與6月組比較，24月組RANKL/OPG比值隨月齡增長下降。
　　 3、24月＋αD3組與24月組比較RANKL mRNA和OPG mRNA升高，但差異無顯著性(p＞0.05)；RANK明顯降低，差異有顯著性(p＜0.05)。
　　 免疫組化的結果：
　　 1、RANKL、OPG表達于軟骨和成骨細胞胞漿和

15、胞核；
　　 2、6周組頜骨、股骨OPG表達高于6月組；
　　 3、24月齡＋αD3干預組OPG表達較24月組增強；
　　 結論：
　　 1、隨著月齡增加，股骨RANKLmRNA明顯升高，OPGmRNA緩慢上升，RANKL/OPG值也隨月齡增加，有利于骨的吸收和轉換；
　　 2、隨月齡增長，頜骨RANKL mRNA水平增加。RANKL/OPG值隨月齡增長24月組較6月組卻下降，說明頜骨骨質疏松與全