青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌(CNE-1)細(xì)胞輻射敏感性的影響及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：本課題分別研究青蒿素（artemisinin）與蒿甲醚（artemether）對p53突變型人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞輻射增敏作用及機(jī)制；比較青蒿素與蒿甲醚對CNE-1細(xì)胞輻射增敏作用的差異性。通過檢測青蒿素與蒿甲醚的藥物濃度和作用時(shí)間對CNE-1細(xì)胞的抑制效應(yīng)，確定用作輻射增敏實(shí)驗(yàn)的藥物濃度及時(shí)間；通過研究青蒿素與蒿甲醚對輻射后CNE-1細(xì)胞增殖能力的影響，探討青蒿素與蒿甲醚對細(xì)胞輻射敏感性的影響；通過對青蒿素、蒿甲醚及60Coγ射

2、線作用后細(xì)胞周期以及細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白weel，cyclinB1表達(dá)水平的檢測，對青蒿素與蒿甲醚輻射增敏機(jī)制進(jìn)行研究。并且，比較分析青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌細(xì)胞輻射增敏作用及作用機(jī)理。
　　 方法：（1）利用四氮唑鹽比色試驗(yàn)（MTT）分別檢測青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)的影響；（2）應(yīng)用克隆形成法檢測青蒿素與蒿甲醚對細(xì)胞輻射敏感性的影響；（3）胞質(zhì)分裂阻滯微核法（cytokinesis block method，CB法

3、）和常規(guī)染色體畸變分析分別研究青蒿素、蒿甲醚對60Coγ射線誘導(dǎo)CNE-1細(xì)胞微核率和染色體畸變的影響；（4）利用流式細(xì)胞術(shù)檢測60Coγ射線作用后青蒿素與蒿甲醚對細(xì)胞周期的影響；（5）應(yīng)用Western Blot法觀察60Coγ射線作用后青蒿素、蒿甲醚對細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白weel，cyclinB1的影響。
　　 結(jié)果：（1）MTT實(shí)驗(yàn)顯示青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌細(xì)胞的抑制率具有濃度及時(shí)間依賴性，其抑制作用隨青蒿素與蒿甲醚濃度

4、和作用時(shí)間的增加而增加；（2）青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌細(xì)胞的抑制率不同，當(dāng)人鼻咽癌細(xì)胞的抑制率達(dá)到10％左右時(shí)，青蒿素與蒿甲醚的作用濃度分別為5μmol/L，和20μmol/L；（3）在濃度為5μmol/L青蒿素與20μmol/L蒿甲醚的作用下，細(xì)胞克隆形成率隨照射劑量增加而減少；青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞均具有輻射增敏作用，蒿甲醚較青蒿素對人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞具有更強(qiáng)的輻射增敏作用；（4）對于CNE-1細(xì)胞，單純照射組和

5、青蒿素+照射組平均致死劑量（D0）分別為5.6Gy、4.4Gy，準(zhǔn)閾劑量（Dq）分別為1.33 Gy、0.285 Gy，輻射增敏比（SER）為1.272；單純照射組和蒿甲醚+照射組平均致死劑量（D0）分別為5.6Gy、3.7Gy，準(zhǔn)閾劑量（Dq）分別為1.33 Gy、0.25 Gy，輻射增敏比（SER）為1.481。蒿甲醚的輻射增敏比（SER=1.481）大于青蒿素的輻射增敏比（SER=1.272），同樣表明蒿甲醚對人鼻咽癌CNE-1細(xì)

6、胞的輻射增敏作用大于青蒿素；（5）微核和染色體分析顯示：青蒿素與蒿甲醚均能夠提高相同劑量照射誘發(fā)的CNE-1細(xì)胞的微核率和染色體畸變率；相同劑量照射，蒿甲醚作用后CNE-1細(xì)胞的微核率和染色體畸變率均高于青蒿素（P<0.01）：（6）流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)，藥物+照射組與單純照射組相比，G0/G1期細(xì)胞比例上升（P<0.01），G2/M期細(xì)胞比例下降（P<0.01）；（7）Weaern-blot分析，藥物+照射組weel蛋白較單純照

7、射組減少，cyclinB1蛋白較單純照射組增加。
　　 結(jié)論：（1）青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞的抑制率隨著藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長而增加；（2）相同濃度的青蒿素對人鼻咽癌細(xì)胞的抑制率高于蒿甲醚的抑制率。（3）青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞均具有輻射增敏作用。（4）蒿甲醚較青蒿素對人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞具有更強(qiáng)的輻射增敏作用。（5）青蒿素與蒿甲醚對CNE-1細(xì)胞的輻射增敏作用與其抑制輻射誘導(dǎo)活化的G2/M