黏液填充在消化道上皮微缺損及腸屏障功能作用的研究.pdf

1、目的：小腸上皮細(xì)胞由隱窩基底部的干細(xì)胞不斷生成并在絨毛頂端脫落，這一過(guò)程形成腸上皮單層細(xì)胞間的微缺損（epithelial gaps）。然而，生理狀態(tài)下，97％的gaps被非通透性的物質(zhì)所填充，從而維持了腸上皮的屏障功能。但究竟被什么物質(zhì)所填充，目前尚不清楚。腸道被覆黏液主要是由杯狀細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，其主要成分Muc2是含致密結(jié)構(gòu)的大分子O-糖基化膠樣黏蛋白，對(duì)黏膜上皮起保護(hù)和潤(rùn)滑作用，抵抗病原微生物及其他有害物質(zhì)對(duì)黏膜的損傷。無(wú)菌

2、的致密的內(nèi)黏液層是阻止腸道細(xì)菌與上皮細(xì)胞接觸的重要的物理屏障，研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)患者，隨著內(nèi)黏液層的破壞，細(xì)菌入侵到原本無(wú)菌的內(nèi)黏液層。黏液的厚度及性質(zhì)在UC的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。共聚焦激光顯微內(nèi)鏡(Confocal Laser Endomicroscopy，CLE)是先進(jìn)的內(nèi)鏡檢查技術(shù)，擁有組織學(xué)水平的分辨率和放大優(yōu)勢(shì)，可以清楚觀察上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，并被譽(yù)為“光學(xué)活檢”。既往

3、研究通過(guò)CLE可以觀察到人類回腸末端和直腸上皮中存在與單個(gè)上皮細(xì)胞大小相似的gaps結(jié)構(gòu)。本研究旨在探討?zhàn)ひ菏欠駞⑴c填充上皮微缺損，并進(jìn)一步評(píng)價(jià)黏液填充上皮微缺損在局部腸屏障功能中的作用。
　　方法：自2014年6月至2014年12月，取就診于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院消化內(nèi)科行共聚焦腸鏡檢查的UC患者及對(duì)照者的回腸末端組織，用卡諾氏液(Carnoy'ssolution)固定過(guò)夜，常規(guī)石蠟切片后行過(guò)碘酸雪夫AB-PAS染色，并行免疫組化方法

4、和免疫熒光方法觀察gaps及Muc2黏蛋白表達(dá)分布情況。另外，分析了自2013年1月至2014年12月至我院行CLE檢查的UC患者和對(duì)照者的CLE回腸末端圖片，選取圖像清晰病例，共有39例UC患者及34例對(duì)照者共聚焦圖像納入本研究。運(yùn)用改良Watson分級(jí)方法，Ⅱ級(jí)為功能性缺損，表現(xiàn)為單個(gè)細(xì)胞脫落伴熒光素滲出;Ⅲ級(jí)為結(jié)構(gòu)性缺損，表現(xiàn)為大片細(xì)胞脫落，伴上皮熒光素滲漏。評(píng)價(jià)WatsonⅡ/Ⅲ gaps缺損周長(zhǎng)占所觀察視野絨毛周長(zhǎng)的百分比，用

5、以評(píng)估回腸末端局部腸屏障功能。并分析兩組之間杯狀細(xì)胞占所觀察視野絨毛上皮細(xì)胞數(shù)目的百分比，用以評(píng)估分泌黏液的杯狀細(xì)胞在兩組之間是否有變化。
　　結(jié)果：在熒光顯微鏡及光學(xué)顯微鏡下，均觀察到黏液參與了填充上皮微缺損，且UC患者上皮微缺損未被黏液填充率增加，兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(27.52(25，29.68)vs12.27(9.7816.67)，p＜0.001）。CLE下可清晰辨認(rèn)杯狀細(xì)胞和gaps結(jié)構(gòu)，另外，分析CLE下回腸末端圖像發(fā)

6、現(xiàn)，UC患者存在明顯的局部腸屏障功能障礙，兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(5.33(3.48，6.62) vs0.27(0.00，0.69)，p＜0.001);且UC患者分泌黏液的杯狀細(xì)胞數(shù)目占上皮細(xì)胞數(shù)目的比率明顯降低，兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(17.38(16.00，19.87) vs23.44(20.24，26.18)，p＜0.001）。對(duì)上皮微缺損(％)與杯狀細(xì)胞(％)進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析，兩組之間呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.74，p＜