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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:分別將人類p100基因,p100的SN基因片段和TSN片段定向連入pERFP-CI質(zhì)粒,使它們可與紅色熒光蛋白在HeLa細(xì)胞內(nèi)融合表達(dá),從而為進(jìn)一步研究p100蛋白及其片段的定位、功能及與其它蛋白的相互關(guān)系奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法: PCR分別擴(kuò)增出p100全長(zhǎng),SN片段和TSN片段基因的序列,定向克隆至真核表達(dá)載體pERFP-CI,構(gòu)建相應(yīng)的3種重組質(zhì)粒。將構(gòu)建成功的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入HeLa細(xì)胞,熒光顯微鏡下可觀察紅色熒光融合蛋白
2、表達(dá)。 結(jié)果:①PCR法獲得p100基因序列,長(zhǎng)度為2659bp,SN基因片段1918bp,TSN基因片段741bp;②將p100全長(zhǎng)與pERFP-CI載體分別進(jìn)行雙酶切得到相應(yīng)的片段,并連接獲得重組質(zhì)粒。將其進(jìn)行雙酶切鑒定可見(jiàn)p100片段。③將經(jīng)過(guò)藍(lán)白斑篩選后的重組子經(jīng)雙酶切再與pERFP-CI載體連接獲得重組質(zhì)粒,相同的酶切鑒定得到SN片段和TSN片段;④轉(zhuǎn)染3種重組質(zhì)粒后可觀察到紅色熒光蛋白的分布及表達(dá)情況。 結(jié)論
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