蛋白酶體抑制劑硼替佐米聯(lián)合伊馬替尼誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡機制的研究.pdf

1、研究背景：白血病(leukaemia)是一組造血干、祖細(xì)胞發(fā)生惡性變，細(xì)胞失去進(jìn)一步分化與成熟能力，阻滯于不同造血階段的異質(zhì)性惡性克隆性疾病。雖然近年來醫(yī)療水平有了很大提高，但相當(dāng)一部分患者因復(fù)發(fā)、耐藥或原發(fā)藥物抵抗轉(zhuǎn)變?yōu)殡y治性白血病，迄今為止尚沒有有效的治療手段，所以積極尋求新的治療方法仍然非常重要。硼替佐米(bortezomib，velacde商品名萬珂)是第一個進(jìn)入臨床的蛋白酶體抑制劑，目前被廣泛用于治療復(fù)發(fā)及難治的血液系統(tǒng)惡性腫

2、瘤。研究顯示硼替佐米在體外對多種惡性腫瘤細(xì)胞株均有一定的抑制作用，但關(guān)于其機制的報道尚不是很明確，更未見與伊馬替尼(imatinib，STI571商品名格列衛(wèi))聯(lián)合作用的研究報道。本實驗選用硼替佐米聯(lián)合伊馬替尼，動態(tài)觀察其對K562細(xì)胞株的凋亡和生長抑制作用，研究蛋白酶體抑制劑能否增加K562細(xì)胞對伊馬替尼的敏感性以及兩者是否能協(xié)同誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡，并探討其可能的機制，為篩選新的治療難治性白血病的藥物提供參考。 方法：

3、 實驗按硼替佐米與伊馬替尼單藥及聯(lián)合用藥的不同濃度分為8組，作用時間分為三個水平：12h、48h、72h。檢測以下相關(guān)指標(biāo)的變化： (1)四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測藥物對細(xì)胞的生長抑制效應(yīng)； (2)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率； (3)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測抗凋亡基因Livin mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： (1)MTT結(jié)果顯示：在同一時間點，與對照組相比，單藥組與聯(lián)合組均使K56

4、2細(xì)胞生存率下降(P＜0.05)，各組呈濃度效應(yīng)關(guān)系。同一藥物濃度作用在不同時間點生存率，以作用48h時最低。聯(lián)合組抑制作用明顯優(yōu)于單藥組(P＜0.05)。以0.25μmol/L伊馬替尼聯(lián)合10nmol/L硼替佐米組在48h時對細(xì)胞的抑制效應(yīng)最強，細(xì)胞生存率僅為37.67％。 (2)流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示：各藥物處理組可見不同程度的凋亡亞G1峰出現(xiàn)，對照組無明顯凋亡峰。各濃度藥物組在48h時凋亡率最高。在各時間點各濃度組凋亡率的高低

5、具有濃度依賴性(P＜0.05)。硼替佐米能增強伊馬替尼對K562細(xì)胞的凋亡作用(P＜0.05)，0.25μmol/L伊馬替尼在48h時間點處理細(xì)胞凋亡率為10.15％，與10nmol/L硼替佐米聯(lián)合后，凋亡率增至56.42％，顯著高于各藥單用時的效果。 (3)RT-PCR檢測結(jié)果顯示：硼替佐米或伊馬替尼單藥可以下調(diào)K562細(xì)胞中Livin mRNA的表達(dá)(P＜0.05)，呈劑量依賴性(P＜0.05)，且在藥物作用48h時達(dá)最大效