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文檔簡介
1、稻瘟病是水稻上重要的病害之一,其病原菌為子囊菌Magnaporthegrisea。了解M.grisea的致病機理不僅有利于稻瘟病的防治,而且作為研究植物病原真菌與寄主互作的理想模式系統(tǒng),對于了解其它真菌的致病機理也有重要意義。致病相關(guān)基因的克隆和分析是達到這一目標的有效途徑。本文克隆了在稻瘟病菌中致病相關(guān)基因MgS11、MgATG5和MgATG8,并通過與GFP蛋白的融合研究了MgS11和MgATG5基因的表達,通過基因取代的方法分析了
2、MgS11、MgATG5和MgATG8基因在稻瘟病菌致病性及其他相關(guān)過程的作用。具體研究結(jié)果如下: 1.利用稻瘟病菌附著胞cDNA文庫,在文庫中找到一條S11基因,定名為MgS11;利用酵母中ATG5和ATG8基因序列,在稻瘟病菌中找到同源基因,定名為MgATG5和MgATG8。通過PCR獲得了這些基因的cDNA全長,并進行序列分析。 2.通過構(gòu)建MgS11、MgATG5和MgATG8基因置換載體和敲除轉(zhuǎn)化,得到Knoc
3、k-out突變子。通過PCR和Southern雜交分析各鑒定出1個Knock-out突變子,明確MgS11、MgATG5和MgATG8在Guy11菌株中均為單拷貝。 3.△MgS11突變子的菌落形態(tài)與野生型不同,生長速度無明顯改變。在N饑餓,C饑餓,高滲(1MNaCl)脅迫條件下的菌落形態(tài),生長速度與野生型比較無明顯差異。△MgS11突變子的產(chǎn)孢能力均大幅度降低?!鱉gS11突變子的疏水性測定表明,MgS11基因影響了稻瘟病菌的
4、疏水性。 4.構(gòu)建PHNS11E、PHNES11和PHS11PE熒光蛋白表達載體,轉(zhuǎn)化至稻瘟病菌原生質(zhì)體。結(jié)果表明:MgS11基因在稻瘟病菌菌絲尖端、分生孢子及成熟的附著胞中均有不同程度的表達,其中,孢子和附著胞中的表達量相對較高。 5.△MgATG5突變子的菌落形態(tài)與野生型不同,生長速度和野生型沒有差別,產(chǎn)孢能力下降,萌發(fā)速度與野生型相比明顯減緩?!鱉gATG5突變子對大麥的致病力比野生型大大下降。 6.通過構(gòu)
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