人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合PHBHHx體內(nèi)異位成骨能力的研究.pdf

1、目的：研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與PHBHHx復(fù)合后經(jīng)體外成骨誘導(dǎo)并植入裸鼠體內(nèi)異位構(gòu)建組織工程骨的能力。
　　方法：用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)傳代培養(yǎng)、流式鑒定后誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞，用Ⅰ型膠原免疫組化染色、堿性磷酸酶染色、茜素紅染色及RT-PCR檢測(cè)其成骨分化。制備PHBHHx多孔支架材料，將第4代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與PHBHHx支架材料復(fù)合培養(yǎng)2周，分誘導(dǎo)組和未誘導(dǎo)組。掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架上的生長(zhǎng)情況。將上述培

2、養(yǎng)2周的誘導(dǎo)組、未誘導(dǎo)組細(xì)胞/支架復(fù)合物植入裸鼠背部皮下，觀察細(xì)胞/支架復(fù)合物形態(tài)變化。分別于術(shù)后1、3、5個(gè)月取材行HE染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色、堿性磷酸酶染色，觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞/PHBHHx復(fù)合物的異位成骨能力。RT-PCR檢測(cè)復(fù)合物誘導(dǎo)組1、3、5個(gè)月和未誘導(dǎo)組1、3個(gè)月的Ⅰ型膠原和骨橋蛋白mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖能力，形態(tài)為均一的成纖維樣長(zhǎng)梭形，呈漩渦狀或平行排列生長(zhǎng)。流式細(xì)

3、胞術(shù)檢測(cè)第4代細(xì)胞膜表面不表達(dá)CD34、CD45，但高表達(dá)CD90和CD105，陽(yáng)性分子的表達(dá)量達(dá)到97％。經(jīng)成骨誘導(dǎo)后，Ⅰ型膠原免疫組化染色、堿性磷酸酶染色、茜素紅染色均呈陽(yáng)性。RT-PCR檢測(cè)誘導(dǎo)組Ⅰ型膠原、骨橋蛋白mRNA均呈陽(yáng)性表達(dá)；未誘導(dǎo)組均呈陰性表達(dá)。PHBHHx表現(xiàn)出良好的親水性和細(xì)胞吸附性。掃描電鏡顯示誘導(dǎo)組細(xì)胞在支架上生長(zhǎng)良好并分泌較多基質(zhì)；未誘導(dǎo)組有細(xì)胞生長(zhǎng)，但未見(jiàn)膠原基質(zhì)分布，孔隙仍清晰可見(jiàn)。細(xì)胞/支架復(fù)合物植入裸

4、鼠體內(nèi)，裸鼠生存狀態(tài)良好。誘導(dǎo)組大小形態(tài)基本保持原狀，質(zhì)地變硬；未誘導(dǎo)組逐漸縮小至完全降解。HE染色誘導(dǎo)組1個(gè)月細(xì)胞沿PHBHHx孔壁內(nèi)生長(zhǎng)，周邊成骨細(xì)胞被覆并產(chǎn)生骨基質(zhì)，骨基質(zhì)內(nèi)見(jiàn)骨細(xì)胞及小血管增生，部分材料降解，3個(gè)月見(jiàn)哈佛斯系統(tǒng)雛形，仍有少量材料殘留，5個(gè)月較多哈佛斯系統(tǒng)樣結(jié)構(gòu)形成，大量骨小梁形成，材料完全降解；未誘導(dǎo)組1個(gè)月細(xì)胞雜亂，見(jiàn)明顯PHBHHx殘留，3個(gè)月無(wú)哈佛斯系統(tǒng)，無(wú)PHBHHx殘留。Ⅰ型膠原免疫組化染色、堿性磷酸酶

5、染色誘導(dǎo)組均呈陽(yáng)性，染色逐漸增強(qiáng)；未誘導(dǎo)組均呈陰性。RT-PCR檢測(cè)誘導(dǎo)組1個(gè)月Ⅰ型膠原mRNA呈陽(yáng)性表達(dá)，骨橋蛋白mRNA呈陰性表達(dá)，3個(gè)月Ⅰ型膠原mRNA呈陽(yáng)性表達(dá)，骨橋蛋白mRNA表達(dá)較弱，5個(gè)月兩者均呈陽(yáng)性表達(dá)；未誘導(dǎo)組均呈陰性表達(dá)。
　　結(jié)論：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力強(qiáng)且能定向分化成骨，可作為骨組織工程理想的種子細(xì)胞；PHBHHx具有良好的生物相容性，可作為骨組織工程載體使用，但其降解性仍需研究以實(shí)現(xiàn)精確可控；人臍帶間