GC誘導TSC表型改變對胸腺細胞分化的影響及YGW的逆轉作用.pdf

1、目的： 觀察糖皮質激素誘導胸腺基質細胞和胸腺樹突狀細胞表型的改變及其對胸腺細胞分化發(fā)育的影響，探討右歸丸對GC誘導TSC表型變化的調節(jié)作用機制和療效物質基礎。為補陽類中藥有效用于防治激素所造成的胸腺損傷提供科學的實驗依據(jù)。 方法： 1.應用GC建立BALB/c小鼠的胸腺損傷模型，觀察GC對小鼠胸腺指數(shù)、胸腺細胞數(shù)等指標的損傷作用。 2.RT-PCR或Real-timePCR法檢測處理小鼠胸腺細胞ICAM-

2、1、LFA-1、CD40、CD44、IL-7和TSLP等分子的基因表達水平 3.采用流式細胞術分析處理小鼠TSC表面MHCⅠ、MHCⅡ分子的表達狀念及其胸腺DC表型的改變。 4.采用流式細胞術和RT-PCR檢測右歸丸對小鼠TSC和DC表型的直接影響。 5.采用以上方法觀察右歸丸與GC同步處理小鼠，TSC、DC表型改變和胸腺細胞分化狀態(tài)。 6.統(tǒng)計方法：所有的實驗數(shù)據(jù)均用SPSS11.5軟件作統(tǒng)計學分析。

3、 結果： 1.GC誘導小鼠胸腺損傷的劑量依賴性 GC可顯著降低小鼠胸腺指數(shù)和胸腺細胞數(shù)，其抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性。隨著GC劑量的增大，胸腺指數(shù)由正常組的0.16％降至0.05％，(p＜0.01)；胸腺細胞數(shù)由15.88×106降至3.06×106，(p＜0.01)。 2.GC下調小鼠TSC表面分子的基因表達 粘附分子ICAM-1、LFA-1的相對表達量隨GC用量的增大(5mg/kg，10mg/kg，

4、20mg/kg)逐漸降低。Real-timePCR顯示IL-7也被顯著降低。 3.GC對小鼠TSC表型的影響 流式細胞術結果顯示：與正常對照組相比，GC(10mg/kg)處理小鼠MHCⅡ+TSC的比例顯著下降(31.50％VS45.70％，p＜0.05)；同時胸腺細胞中DC細胞的比例(2.4％VS1.6％，p＜0.05)和MHCⅡ分子表達能力(79％VS61％，p＜0.01)也顯著降低。隨著GC對胸腺細胞總數(shù)的下調，GC

5、對TSC及DC表型的損傷作用更為突出。 4.右歸丸對正常小鼠胸腺TSC表面分子的促進作用 YGW(20g/kg，30g/kg)能顯著升高胸腺指數(shù)(0.18％VS0.12％，0.17％VS0.12％，P＜0.05)和胸腺細胞數(shù)(36.84×106VS28.81×106，30.92VS28.81×106，P＜0.05)。 PCR結果顯示：右歸丸(20～30g/kg)可提高TSC的ICAM-1、LFA-1基因表達。流式

6、細胞術分析結果顯示：右歸丸(20g/kg，30g/kg)能顯著升高胸腺DC細胞數(shù)量(1.25×106VS0.5×106，1.0×106VS0.5×106，p＜0.01)和表達MHCⅡ分子的能力。 5.右歸丸對GC誘導的TSC表型改變的逆轉效應 右歸丸(20g/kg，30g/kg)能明顯緩解GC誘導的胸腺指數(shù)的下降和胸腺細胞數(shù)的減少(p＜0.05)。 PCR結果顯示：GC與右歸丸的同步處理，可明顯改善GC誘導的胸腺

7、ICAM-1、LFA-1的低表達狀態(tài)，其中大劑量右歸丸(30g/kg)可使ICAM-1、LFA-1的表達恢復到正常水平。 流式細胞術分析結果顯示：右歸丸對GC誘導的小鼠胸腺MHCⅡ+TSC細胞數(shù)量的下調有逆轉作用(4～5.7×106VS1.9×106，p＜0.01)。 6.右歸丸對GC誘導的胸腺DC表型改變的保護效應 與GC組相比，GC+YGW能明顯上調GC導致的MHCⅡ+TDC比例下降狀態(tài)，由57％升至79％(

8、P＜0.01)。 7.右歸丸對GC誘導的胸腺細胞異常分化的保護作用 伴隨著右歸丸對激素誘導的TSC表型改變的保護作用，與GC組相比，胸腺T細胞各亞群細胞的數(shù)量，均有不同程度的升高。尤其是對GC敏感的雙陽性T細胞。 8.右歸丸單體成分梓醇、烏頭堿對小鼠TSC及DC細胞表型的影響 梓醇(5mg/kg)能有效提高胸腺指數(shù)和胸腺細胞數(shù)，同時顯著降低MHCⅠ+TSC細胞的比例(92％VS44％)和數(shù)量(6.9×10

9、7VS3.2×107，p＜0.001)、以及MHCⅠ+TDC細胞的比例(96％VS78％)和數(shù)量(0.16×107VS0.11×107，p＜0.05)，對于MHCⅡ+TSC的比例及MHCⅠ+TDC細胞比例均沒有顯著影響。提示梓醇對胸腺的保護作用主要通過抑制TSC細胞MHCⅠ類分子高表達實現(xiàn)的。 烏頭堿(3μg/kg)能顯著升高小鼠胸腺MHCⅡ+TSC細胞的比例(38％VS64％，p＜0.001)和數(shù)量(3.4×107VS6×10