三丁基錫對(duì)HepG2細(xì)胞DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)的影響極其誘發(fā)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究.pdf

1、三丁基錫(Tributyltin，TBT)是人類活動(dòng)帶入環(huán)境中的最具毒性的化學(xué)品之一，目前已對(duì)環(huán)境造成廣泛的污染。目前研究已發(fā)現(xiàn)了TBT所具有的多種多樣的毒性效應(yīng)，其中引發(fā)細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是這眾多的毒性效應(yīng)在細(xì)胞層面的機(jī)制基礎(chǔ)，然而目前TBT引發(fā)細(xì)胞凋亡的詳細(xì)機(jī)制仍不清楚。TBT引發(fā)的DNA損傷在近年來被研究者所關(guān)注，然而相應(yīng)的響應(yīng)機(jī)制以及其與TBT誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的關(guān)系目前還未見報(bào)道。本研究擬利用不同濃度的TBT，以人肝癌細(xì)胞株HepG2

2、為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究TBT對(duì)細(xì)胞中DNA損傷修復(fù)能力的影響，同時(shí)探討其與TBT誘發(fā)的細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。研究利用1-4μMTBT暴露HepG2細(xì)胞3hr，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)細(xì)胞中關(guān)鍵的DNA損傷感受器——RFC(replication factor C)、PCNA(proliferating cell nuclear antigen)以及PARP-1(poly(ADP-ribose)polymerase-1）的表達(dá)變化，借以考

3、察TBT對(duì)細(xì)胞DNA損傷修復(fù)能力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TBT暴露會(huì)抑制細(xì)胞DNA損傷修復(fù)的能力。此外，我們利用免疫印跡分析考察TBT暴露后，細(xì)胞中DNA損傷信號(hào)的關(guān)鍵傳遞者——PIKK(phosphoinositide 3-kinase-like kinase)家族蛋白的表達(dá)變化及其下游信號(hào)分子p53的磷酸化水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)TBT誘發(fā)的DNA損傷信號(hào)可以通過ATR(ataxiatelangiec tasiamutated and rad-3 r

4、elated)傳遞給p53蛋白。我們進(jìn)一步利用轉(zhuǎn)染熒光素酶報(bào)告載體的方法，考察了TBT暴露對(duì)p53轉(zhuǎn)錄活性的影響，結(jié)果表明TBT暴露后，p53會(huì)傾向性的激活促凋亡蛋白PUMA(p53-upregulated modulatorofapoptosis)，并且天胱蛋白酶(caspase)活性亦被誘導(dǎo)，從而推動(dòng)細(xì)胞走向凋亡。本研究首次報(bào)道了TBT對(duì)DNA損傷修復(fù)能力的抑制效應(yīng)，同時(shí)首次探討了TBT引發(fā)的DNA損傷以及細(xì)胞凋亡之間的可能聯(lián)系。結(jié)