伴晶狀體脫位的Marfan綜合癥的候選基因突變篩查和特異性篩查基因芯片的初步設計及驗證.pdf

1、本研究擬通過分析中國人群MFS患者的臨床表現和檢測其基因突變情況，豐富國內外MFS的基因組和表現型的相關研究，為今后MFS的分子診斷提供依據，也為國際人類基因變異組計劃提供中國人群的資料。另一方面，設計一款切實可行的用于MFS產前篩查的基因芯片，為優(yōu)生優(yōu)育護航。 第一部分伴晶狀體脫位的Marfan綜合癥眼部表型分析 本研究收集了10個伴先天性晶狀體脫位的Marfan綜合癥家系。所有患者和家庭成員均接受全面病史回顧、眼科檢

2、查(裂隙燈、A超、B超和角膜曲率檢查)和全身檢查(心臟彩超、血同型半胱氨酸檢查等)，檢查結果以登記表的形式統(tǒng)一詳細記錄并進行匯總分析。眼部的裂隙燈照片分析發(fā)現MFS患者的晶狀體脫位的方向以上方多見。對患者按年齡分層后，采用統(tǒng)計學的方法分析其角膜曲率和眼軸長度與正常對照組有無顯著性差異。結果提示在成年組，MFS患者的角膜曲率明顯較正常對照組小(P＜0.0001)，而眼軸長度明顯較正常對照組長(P=0.040)。這兩項指標在未成年組無顯著性

3、差異(P＞0.05)。這一結果提示可以考慮將異常扁平角膜列為成年MFS患者診斷的主要標準之一。另外，本研究還發(fā)現在MFS人群中，房間隔缺損(ASD)的比例相對較高。但是，ASD是否可以考慮為MFS的一個心血管表現尚有待進一步證實。 第二部分Marfan綜合癥相關候選基因的突變篩查 本研究在成功獲得MFS患者的基因組DNA之后，設計了66對PCR反應引物，對Marfan綜合癥相關候選基因FBN1進行了篩查。為提高篩查效率，

4、本研究設計了一套篩查策略，按優(yōu)先順序分6組對FBN1的65個外顯子及內、外顯子連接處進行了篩查。結果發(fā)現7個位于FBN1編碼區(qū)的基因突變：3個為國內外首次發(fā)現(2號外顯子的c．203G＞T突變；5號外顯子的c．502T＞C突變和16號外顯子的c．2096G＞C突變)；4個為國內首次發(fā)現(4號外顯子的c．364C＞T突變，13號外顯子的c．1633C＞T，15號外顯子的c．1879C＞T突變，37號外顯子的c．4588C＞T突變)。這7個

5、突變在正常對照的100條染色體中均不存在，排除了單核苷酸多態(tài)性(SNP)的可能。通過基因型和表現型的相關分析，本研究發(fā)現發(fā)現MFS的EL表現型和原纖蛋白-1內半胱氨酸殘基的取代或者被取代密切相關。這一患病人群基因突變多集中在FBN1的前15個外顯子。MFS患者中，精氨酸到半胱氨酸殘基突變的復發(fā)頻率明顯高于其它類型的突變。另外，本研究還首次報道了一例位于原纖蛋白-1的N端結構域的FBN1基因突變。 第三部分Marfan綜合癥特異性

6、篩查基因芯片的初步設計和驗證 在Marfan綜合癥相關候選基因的突變篩查的基礎上，本研究結合熒光標記單堿基延伸技術和基因芯片技術，設計了一款用于檢測MFS的特異性篩查基因芯片。并選取了6種不同突變的病人(8個突變樣本)進行了基因芯片的驗證。結果提示此款芯片具有很高的檢出率(6/6)，和很好的重復性(2/2)。該芯片可同時為6種突變提供診斷，為今后設計一款多種遺傳病，多個家系，多個位點的超高通量集合基因芯片的開展提供了依據，也為M

7、arfan綜合癥特異性產前篩查提供了可能。 結論 1、本研究報道了10個家系的中國人群MFS患者的臨床表現，并首次采用按年齡分層的方法，系統(tǒng)性的研究了患者的眼部表現。本研究提示成年MFS患者角膜曲率明顯小于正常人群，可考慮將異常扁平角膜作為成年MFS患者診斷的主要標準之一。 2、本研究報道了的3個國內外均未見報道的FBN1的基因突變：c．203G＞T(p．Cys68Phe)，c．502T＞C(p．Cys168Ar

8、g)和c．2096G＞C(p．Cys699Ser)；4個國內未見報道的突變：c．364C＞T(pArg122Cys)，c．1633C＞T(pArg545Cys)，c．1879C＞T(pArg627Cys)和c．4588C＞T(pArg1530Cys)。 3、本研究通過對伴EL的MFS患者的基因型和表現型的相關分析，發(fā)現MFS的EL表現型和原纖蛋白-1內Cys殘基的取代或者被取代密切相關。這一患病人群基因突變多集中在FBN1的前1