神經(jīng)調(diào)節(jié)因子對ErbB2非過表達乳腺癌細胞增殖侵襲轉(zhuǎn)移的作用及機制.pdf

1、目的：應(yīng)用ErbB2受體功能抑制劑AG825，探討在ErbB2非過表達乳腺癌細胞中是否存在神經(jīng)調(diào)節(jié)因子（neuregulin，NRG）/ErbB2這種配體作用方式的信號通路的活化，進而研究神經(jīng)調(diào)節(jié)因子通過NRG/ErbB2信號通路方式對ErbB2非過表達乳腺癌細胞MDA-MB-231增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的作用及分子機制。 方法：以人ErbB2非過表達乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7為研究對象，臺盼藍拒染法和細胞計數(shù)檢測細胞生

2、長曲線，免疫細胞化學(xué)法和Western-blot法檢測細胞中NRG蛋白表達。應(yīng)用ErbB2受體功能抑制劑AG825處理兩株細胞，噻唑蘭比色（MTT）法檢測比較兩株細胞的增殖抑制作用，求出AG825作用MDA-MB-231細胞48h的中效濃度IC50。40μmol/L AG825處理MDA-MB-231細胞48h，Transwell小室進行人工重組基底膜（Matrigel）侵襲和運動實驗；明膠酶譜法檢測細胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶2（matr

3、ix metalloproteinase2，MMP-2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase9，MMP-9）的變化；Western-blot檢測細胞中MMP-2、突變型p53（mutantp53，mtp53）和缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor-1 alpha，HIF-1α）蛋白表達；RT-PCR檢測細胞中HIF-1α mRNA表達的變化；流式細胞術(shù)檢測細胞周期和細胞凋亡

4、。 結(jié)果：MDA-MB-231細胞較MCF-7細胞具有較強的增殖生長能力。免疫細胞化學(xué)法檢測顯示在MDA-MB-231細胞內(nèi)呈NRG顯著表達，MCF-7細胞中無NRG表達。Western-blot實驗檢測MDA-MB-231細胞可見分子量44KD的NRG抗體陽性反應(yīng)條帶。應(yīng)用ErbB2受體功能抑制劑AG825后，MDA-MB-231細胞的增殖抑制作用明顯，AG825作用MDA-MB-231細胞48h的IC50為56.59μmol

5、/L。40μmol/L AG825處理MDA-MB-231細胞48h后，細胞的侵襲、遷移能力均下降（P<0.05）；MMP-2、MMP-9的活性降低（P<0.05）；MMP-2蛋白表達減少（P<0.05）；mtp53、HIF-1α蛋白表達減少（P<0.05）；HIF-1α，mRNA表達減少（P<0.05）；細胞周期阻滯在G0/G1期（P<0.05）；細胞凋亡增加（P<0.05）。 結(jié)論：ErbB2非過表達乳腺癌細胞MDA-MB-