TLR2信號通路對人乳腺癌細胞轉移侵襲作用的研究.pdf

1、乳腺癌是女性癌癥患者中最常見的惡性腫瘤之一。乳腺癌細胞的轉移性是引起乳腺癌患者死亡的主要原因,也是乳腺癌治療中的最大難題之一。因此研究乳腺癌的預防與臨床治療倍受關注,研究乳腺癌細胞轉移侵襲機制對乳腺癌的治療具有重要的意義。
　　Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)是進化上十分保守的重要模式識別受體(PPRs),主要表達于人類免疫細胞和上皮細胞中。通過識別病原相關分子模式(PAMPs),在機體先天性免疫

2、反應發(fā)生過程中發(fā)揮關鍵作用。近來研究發(fā)現(xiàn),TLRs在包括乳腺癌在內的人類惡性腫瘤細胞表面均有表達,并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉移侵襲過程中發(fā)揮重要功能。
　　實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),Toll樣受體2(toll-like receptor2,TLR2)在兩種乳腺癌細胞MDA-MB-231(高轉移性乳腺癌細胞系)和MCF-7(低轉移性乳腺癌細胞系)中的表達有較大差異,即高表達于MDA-MB-231細胞而低表達于MCF-7細胞,其表達量相差約15

3、00倍。TLR2的表達差異是否為導致兩種細胞轉移侵襲能力差別的主要原因所在?其機制是怎樣的?為解決這些問題,本課題即以兩種乳腺癌細胞株MDA-MB-231和 MCF-7為研究對象,以LTA作為TLR2的激活劑,特異性的激活TLR2信號通路,研究TLR2信號通路對乳腺癌細胞轉移侵襲能力的影響,探討TLR2信號通路在腫瘤轉移侵襲過程中的作用機制,為惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉移機制的研究提供理論基礎。
　　本研究利用MTT法、細胞創(chuàng)口愈合實

4、驗、Transwell基質膠侵襲實驗以及軟瓊脂克隆形成實驗檢測了LTA刺激后兩種乳腺癌細胞的體外增殖能力、轉移侵襲能力和非錨定生長能力,發(fā)現(xiàn)LTA刺激均能使兩種乳腺癌細胞的增殖能力有所提高,MDA-MB-231細胞在接受刺激后增殖能力是未接受刺激的對照組的接近2倍,其增強幅度明顯明顯高于MCF-7,且LTA刺激后的MDA-MB-231細胞的轉移侵襲能力和非錨定生長能力相比對照組其增強幅度均要明顯高于MCF-7細胞。進而我們將兩種細胞表面

5、的TLR2用特異性抗體封閉后,發(fā)現(xiàn)兩種細胞的轉移侵襲能力和非錨定生長能力相對于未進行TLR2封閉的細胞均發(fā)生了不同程度的降低,MDA-MB-231的各種能力的降低幅度也明顯高于MCF-7。由此我們認為TLR2表達量的不同是造成兩種細胞轉移侵襲能力不同的關鍵因素。
　　利用ELISA實驗技術檢測了兩種細胞在LTA刺激后腫瘤轉移相關因子VEGF、IL-6和TGF-β1的表達情況以及在TLR2中和抗體封閉作用后兩種細胞腫瘤轉移相關因子的

6、表達分泌的變化情況,發(fā)現(xiàn)LTA刺激后MDA-MB-231細胞的VEGF、IL-6和 TGF-β1分泌量均明顯提高,其提高幅度分別是MCF-7細胞的1.5倍、1.3倍和1.2倍。而TLR2抗體封閉作用后的兩種細胞的腫瘤轉移相關因子的分泌情況均降低,MDA-MB-231細胞降低幅度明顯高于MCF-7細胞。因此我們推斷,LTA可能是通過激活TLR2信號通路進而誘導腫瘤轉移相關因子的分泌來影響了人乳腺癌細胞的轉移侵襲能力的變化。
　　最后

7、,利用JNK抑制劑SP600125抑制TLR2介導的信號通路下游關鍵激酶JNK的活性,檢測到兩種細胞在JNK激酶活性受到抑制后,LTA刺激引起的細胞轉移侵襲能力和非錨定生長能力均受到了不同程度的抑制,對MDA-MB-231細胞的抑制程度要明顯高于MCF-7細胞。說明了JNK在TLR2信號通路介導的人乳腺癌細胞轉移侵襲作用機制中發(fā)揮了重要作用。
　　綜上所述,本課題通過對TLR2信號通路在兩種乳腺癌細胞轉移侵襲過程中作用進行探究,并