miR-638在HDL代謝中的作用及機制探討.pdf

1、背景:
　　脂代謝紊亂是國人沉重的健康負擔(dān)。高膽固醇血癥是動脈粥樣硬化性心血管疾病的主要危險因素。除膽固醇水平升高外,高甘油三酯伴低高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)在中國人脂代謝紊亂中也十分常見。高甘油三酯和低HDL-C已經(jīng)被確認為作為動脈粥樣硬化發(fā)生的獨立危險因子。血脂異常受表觀遺傳學(xué)調(diào)控,microRNA是表觀調(diào)控的重要方式,研究microRNA在HDL代謝中的作用和機制,對血脂異?；颊叩念A(yù)防和治療提供新的證據(jù)。
　　目

2、的:
　　研究在人群中miR-638與HDL-C的關(guān)系;探討miR-638在高密度脂蛋白(HDL)代謝中的作用及機制。
　　方法:
　　第一部分:①選取3例低HDL-C患者與3例HDL-C正常者血漿miRNA芯片篩查,篩選出有差異表達的miRNA20種;②在20例低HDL-C患者與20例HDL-C正常者中擴大樣本篩查,發(fā)現(xiàn)miR-638、miR-452保持組間水平的統(tǒng)計學(xué)差異(在低HDL-C患者中高表達)。最終將miR

3、-638入選為進一步研究的候選miRNA;③在血脂康臨床干預(yù)隨機對照雙盲試驗中,驗證 miR-638、miR-33a、miR-33b與HDL-C的關(guān)系。發(fā)現(xiàn)了血脂康干預(yù)后HDL-C升高,miR-638、miR-33a、miR-33b較基線水平升高。
　　第二部分:①在人源組織中確證人THP-1、HepG2細胞中miR-638、miR-33a、miR-33b表達;②在富膽固醇、去膽固醇人THP-1細胞模型中確證miR-638、miR

4、-33a、miR-33b表達差異。
　　第三部分:將質(zhì)粒分為四組:3′UTR STARD10野生型+對照;3′UTR STARD10野生型+miR-638類似物;3′UTR STARD10突變型+對照;3′UTR STARD10突變型+miR-638類似物。通過雙報告基因系統(tǒng)檢測,觀察組間Luc/R-Luc差異,探討miR-638與STARD10是否特異性結(jié)合。在HepG2細胞中分別用miR-638mimic、miR-638 in

5、hibitor和對照組干預(yù),明確STARD10蛋白表達的變化。
　　結(jié)果:
　　第一部分:通過人群芯片篩查及擴大樣本量篩查,觀察到低HDL-C組與HDL-C正常組間miR-638差異有統(tǒng)計學(xué)意義,HDL-C正常組間miR-638表達較高。在血脂康臨床干預(yù)隨機對照雙盲試驗中,服用血脂康后 HDL-C較基線水平升高(P=0.018),miR-638、miR-33a、miR-33b較基線水平升高(P值分別為0.045、0.022、

6、0.021)。
　　第二部分:在HepG2細胞中,辛伐他汀終濃度為5μM與空白對照組間miR-638表達有差異;在人 HepG2細胞中,辛伐他汀5μM組較空白對照組miR-638、miR-33a、miR-33b升高(P值分別為0.029、0.002、P<0.001);acLDL組較空白對照組miR-638、miR-33a、miR-33b降低(P值分別為0.032、0.010、0.001)。在THP-1細胞中,辛伐他汀5μM組較空白

7、對照組miR-638、miR-33a、miR-33b升高(P值分別為0.033、0.033、P<0.001),acLDL組較空白對照組miR-638、miR-33a、miR-33b降低(P=0.038、0.030、0.009)。
　　第三部分:3′UTR STARD10野生型+miR-638類似物和3′UTRSTARD10突變型+miR-638類似物均較對照組Luc/R-Luc下降,(分別為 P<0.001和P=0.03)。3′U

8、TR STARD10野生型+miR-638類似物較3′UTR STARD10突變型+miR-638類似物L(fēng)uc/R-Luc低(P=0.013)。在HepG2細胞中分別用miR-638mimic、miR-638inhibitor和對照組干預(yù)24小時后,miR-638 mimic較對照組STARD10蛋白表達下降(P=0.004),miR-638 inhibitor較對照組STARD10蛋白表達升高(P=0.008)。
　　結(jié)論:

9、r>　　1.miR-638、miR-33a、miR-33b與HDL-C水平相關(guān),血脂康治療后miR-638、miR-33a、miR-33b較基線水平負反饋性升高;
　　2.在細胞水平驗證辛伐他汀干預(yù)后miR-638、miR-33a、miR-33b反饋性升高,乙酰化低密度脂蛋白干預(yù)后miR-638、miR-33a、miR-33b反饋性降低;
　　3.miR-638可與STARD10特異結(jié)合,過表達miR-638可以下調(diào)STAR