苯丙酮尿癥常見突變位點(diǎn)檢測及中國人群PAH基因突變譜的調(diào)查.pdf

1、苯丙酮尿癥(phenylketonuria，PKU)是一種常見的常染色體隱性遺傳代謝病，嚴(yán)重危害著人類健康。該病主要是由于苯丙氨酸羥化酶(phenylalaninehydroxylase，PAH)基因突變所致，使得PAH活性下降或者缺乏，導(dǎo)致苯丙氨酸不能正常代謝，血液、組織中的苯丙氨酸及其旁路代謝產(chǎn)物堆積，最終導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)受到不可逆的損害，而出現(xiàn)精神行為異常、癲癇和智力低下等癥狀。PKU是一種可通過飲食控制進(jìn)行治療的遺傳病，早發(fā)現(xiàn)早

2、治療是其治療的關(guān)鍵，但是昂貴的治療費(fèi)用給家庭和社會帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，而且不能從根本上降低PKU患兒的出生率。目前，解決這一系列問題的重要手段是積極地開展基因診斷和產(chǎn)前診斷。本論文利用實(shí)時PCR技術(shù)平臺，提出了一種快速、準(zhǔn)確檢測PKU基因突變的新方法，并將該方法應(yīng)用于中國人群PAH基因突變譜的研究當(dāng)中，最終完善了中國人群的PAH基因突變譜，具有重要的臨床意義，為中國的PKU防控奠定了基礎(chǔ)。
　　第一章，分別對PKU的發(fā)現(xiàn)、分類和

3、分子機(jī)制，以及PAH基因的特點(diǎn)進(jìn)行綜述，并且介紹了臨床常用的生化檢測方法和基因診斷的研究進(jìn)展，另外還對PKU的流行病學(xué)研究現(xiàn)狀，主要包括PKU的篩查與產(chǎn)前診斷開展現(xiàn)狀和PAH基因突變譜的研究狀況進(jìn)行概述。最后，提出了本論文的研究目的、內(nèi)容及意義。
　　第二章，我們采用了多色探針熔解曲線分析技術(shù)用于PAH基因突變的快速檢測。首先對該技術(shù)的原理進(jìn)行了詳細(xì)的介紹，之后針對中國人群PAH基因突變的特點(diǎn)，我們建立了三管四色的突變檢測體系，實(shí)

4、現(xiàn)了對中國人群常見的27種PAH基因突變類型的檢測，并系統(tǒng)考察了該項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于突變檢測的可行性。整個實(shí)驗(yàn)過程可以在4小時內(nèi)完成，靈敏度達(dá)到100pg人類基因組DNA/reaction。最后對112份臨床標(biāo)本進(jìn)行雙盲實(shí)驗(yàn)，其中除了17個等位基因在體系檢測范圍之外，剩余207個等位基因和DNA測序結(jié)果一致，驗(yàn)證了該體系檢測PAH基因突變的準(zhǔn)確性和可靠性。
　　第三章，為深入了解中國人群PAH基因的突變類型及突變頻率，繪制中國人群的PA