氯化鑭在磨損顆粒誘導(dǎo)無(wú)菌性炎癥中作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度和劑量的氯化鑭對(duì)人工關(guān)節(jié)磨損顆粒刺激無(wú)菌性炎癥反應(yīng)的作用效果，為進(jìn)一步觀察氯化鑭對(duì)磨損顆粒導(dǎo)致炎性骨溶解的作用效果及進(jìn)一步研究其作用機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　方法:采用真空球磨法體外制備人工關(guān)節(jié)磨損顆粒。體外實(shí)驗(yàn)中，RAW264.7細(xì)胞被隨機(jī)分成8組:空白對(duì)照組、磨損顆粒組、磨損顆粒+氯化鑭組(2.5μ mol/L、10μmol/L和100μmol/L)和氯化鑭組(2.5μ mol/L、10μmol/

2、L和100μmol/L);分組處理48h后采用CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)分別進(jìn)行細(xì)胞活性和凋亡檢測(cè)，并用ELISA、RT-PCR和western blot檢測(cè)TNF-α、IL-1β和NF-κB基因及蛋白的表達(dá)水平。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，采用45只雄性BALB/c小鼠建立氣囊模型，并隨機(jī)分為空白對(duì)照組、磨損顆粒組和磨損顆粒+氯化鑭組(0.1μmol、0.9μ mol和8.1μmol);分組處理后第7天處死小鼠并收集囊壁組織，通過(guò)HE染色觀察囊壁組織中炎

3、癥反應(yīng)情況，并采用ELISA、RT-PCR和western blot在基因及蛋白水平檢測(cè)囊壁組織中TNF-α、IL-1β和NF-κ B的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:分組處理期間，三種濃度和劑量的氯化鑭均未影響RAW264.7細(xì)胞的活性和小鼠的存活。磨損顆粒在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均可有效刺激無(wú)菌性炎癥的產(chǎn)生。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示2.5和10μ mol/L氯化鑭可顯著抑制TNF-α、IL-1β以及NF-κB的表達(dá)(P＜0.05)，但100μ mol/L

4、氯化鑭未見(jiàn)明顯的炎癥抑制作用，甚至促進(jìn)炎癥的產(chǎn)生。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示0.9μmol氯化鑭能抑制小鼠氣囊模型中磨損顆粒誘導(dǎo)的促炎癥因子及NF-κB基因和蛋白的表達(dá)(P＜0.05);0.1μmol和8.1μmol氯化鑭未見(jiàn)明顯炎癥抑制效果，8.1μmol氯化鑭甚至產(chǎn)生不良反應(yīng)。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)中氯化鑭未對(duì)RAW264.7細(xì)胞和BALB/c小鼠產(chǎn)生毒性作用;一定濃度和劑量的氯化鑭可抑制體內(nèi)外磨損顆粒刺激產(chǎn)生的無(wú)菌性炎癥，其作用機(jī)制可能與