UGBP在NIH3T3和HBE細胞上的變化及機制的初步探討.pdf

1、目的：子宮珠蛋白(uteroglobin，UG)是由Clara細胞分泌的一種高保守，多功能的小分子分泌蛋白，它的生物學(xué)效應(yīng)可能有賴于子宮珠蛋白結(jié)合蛋白(Uteroglobin-binding protein，UGBP)的介導(dǎo)。但目前，國內(nèi)外對UGBP的研究了解甚少，遠遠滯后于對其天然配體UG的研究。本實驗首先在整體水平上觀察小鼠肺纖維化時UGBP的變化，在此基礎(chǔ)上進一步在細胞水平上觀察TGF-β1對NIH3T3和HBE細胞UGBP表達的

2、影響，并初步探討其胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制，為進一步探討肺纖維化過程中肺內(nèi)UGBP變化的機制研究提供新的線索。
　　 方法：①采用氣管注射博萊霉素復(fù)制小鼠肺纖維化模型，用HE、Massson染色以及real-timePCR檢測TGF-β1和Ⅲ型膠原mRNA的變化來驗證纖維化模型的成功性，再用real-timePCR和組織芯片免疫組化檢測UGBP的變化。②real-timePCR檢測NIH3T3和HBE細胞上UGBP mRNA的表達；③采

3、用smad3蛋白抑制劑(SIS3)預(yù)處理，real-timePCR法檢測NIH3T3和HBE上UGBP mRNA的表達
　　 結(jié)果：⑴HE染色顯示：注射博萊霉素21天可見成纖維細胞明顯增加，并形成纖維化病灶。Massson染色顯示：注射博萊霉素第7天，膠原合成開始增加，到14、21天膠原已大量合成沉積。Real-timePCR檢測TGF-β1和Ⅲ型膠原mRNA的結(jié)果顯示：TGF-β1mRNA的表達在注射博萊霉素第7，14，21天

4、升高(p<0.05)；Ⅲ型膠原mRNA在第7天升高，第14，21天升高明顯(p<0.05)。⑵整體水平上，real-timePCR結(jié)果顯示：UGBP mRNA在第7天表達上調(diào)(p<0.05)；到第14天，有上調(diào)趨勢；第21天，與第7，14天比較已有下調(diào)趨勢，與對照組比較基本無變化。組織芯片免疫組化結(jié)果顯示：UGBP蛋白在支氣管上皮細胞，炎癥細胞和肺泡上皮細胞表達陽性強，纖維灶成纖維細胞選擇性高表達；氣道上皮細胞比肺泡上皮細胞，間質(zhì)成纖維

5、細胞UGBP蛋白的表達陽性要強。⑶BLM(1μ g/ml)作用NIH3T3細胞8h、12h，real-timePCR結(jié)果顯示：BLM能下調(diào)其UGBP mRNA的表達(Sh組與對照組比較，p<0.05；12h組與對照組比較，p<0.01)。⑷TGF-β1(10ng/ml)作用NIH3T3細胞8h、12h，real-timePCR結(jié)果顯示：TGF-β1能下調(diào)其UGBP mRNA的表達，(8h組與對照組比較，p<0.05；12h組與對照組比較

6、，p<0.01)；有血清空白組和無血清空白組比較，有血清組UGBPmRNA表達明顯下調(diào)(p<0.01)。⑸TGF-β1(10ng/ml)作用于HBE細胞12h，real-timePCR結(jié)果顯示：TGF-β1能上調(diào)其UGBPmRNA的表達(p<0.01)。⑹SIS3預(yù)處理可以減輕TGF-β1對NIH3T3細胞UGBP mRNA表達下調(diào)的效應(yīng)，SIS3+TGF-β1組與TGF-β1組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；SIS3預(yù)處理可以減輕T

7、GF-β1對HBE細胞UGBP mRNA表達上調(diào)的效應(yīng)，SIS3+TGF-β1組與TGF-β1組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).
　　 結(jié)論：①在肺纖維化過程中，UGBP mRNA的表達呈現(xiàn)一過性上調(diào)。②TGF-β1在離體培養(yǎng)條件下對NIH3T3和HBE細胞UGBPmRNA的表達具有不同的影響，可抑制NIH3T3細胞和促進HBE細胞UGBPmRNA的表達。③TGF-β1調(diào)節(jié)NIH3T3和HBE細胞UGBP mRNA表達的作用有