鎘預(yù)暴露增加NIH3T3細(xì)胞對(duì)雙酚A誘導(dǎo)的DNA氧化損傷敏感作用的研究.pdf

1、目的：
　　氯化鎘（CdCl2）或雙酚A（BPA）均普遍存在于我們的日常生活中，我們可以很容易的通過(guò)經(jīng)口、呼吸等途徑共同暴露于CdCl2與 BPA。以往研究發(fā)現(xiàn)低劑量或無(wú)毒劑量CdCl2濃度可能會(huì)增強(qiáng)其他DNA毒物比如γ-射線、苯并芘等對(duì)DNA的損傷作用。然而，目前尚未見(jiàn)關(guān)于CdCl2與BPA復(fù)合暴露的毒性研究。本研究以無(wú)毒劑量CdCl2濃度預(yù)處理NIH3T3細(xì)胞，再施以BPA處理，探討預(yù)暴露鎘對(duì)NIH3T3細(xì)胞對(duì)BPA誘導(dǎo)的DN

2、A氧化損傷的敏感性影響及其可能機(jī)制。
　　方法：取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的NIH3T3細(xì)胞鋪板，貼壁后，處或不處以5或10μM CdCl224h,然后再處或不處理2、10、50μM劑量的BPA24h。共有4組：（1）正常對(duì)照組；（2）CdCl2處理組：?jiǎn)为?dú)5或10μM CdCl2組；（3）BPA處理組：?jiǎn)为?dú)2、10或50μM劑量的BPA處理組；（4）CdCl2預(yù)處理+BPA組：以5或10μM CdCl2預(yù)處理24h,然后再處以2、10、50μ

3、M劑量的BPA24h；BPA處理24h后，分別用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒試劑盒（CCK-8）檢測(cè)細(xì)胞活力；LDH細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞LDH的釋放；碧云天活性氧檢測(cè)試劑盒測(cè)定細(xì)胞ROS含量；堿性彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NIH3T3細(xì)胞DNA損傷，免疫熒光及Western blot檢測(cè)γH2AX的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化；TUNEL熒光染色及Western blot檢測(cè)細(xì)胞的凋亡及凋亡分子PARP的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：○1與正常對(duì)照組相比

4、，單獨(dú)CdCl2處理不引起細(xì)胞活力、LDH釋放、ROS含量、彗星參數(shù)（Tail DNA％、TL、TM、OTM）、γH2AX的表達(dá)、細(xì)胞周期、TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及凋亡分子PARP表達(dá)水平的改變（P>0.05)。
　　○2與正常對(duì)照組相比，2μM或10μM BPA單獨(dú)處理不引起細(xì)胞活力、LDH釋放、ROS含量、彗星參數(shù)（Tail DNA%、TL、TM、OTM）、γH2AX的表達(dá)、細(xì)胞周期、TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞及凋亡分子PARP表達(dá)水平

5、的改變(P>0.05)；然而，50μM BPA單獨(dú)處理與對(duì)照組相比，則引起了細(xì)胞活力下降、LDH釋放增加、ROS產(chǎn)生增多、彗星參數(shù)（Tail DNA%、TL、TM、OTM）顯著增加、γH2AX的表達(dá)增加、G2期阻滯、TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞及PARP表達(dá)增加(P<0.05)。
　　○3 CdCl2預(yù)處理增加了NIH3T3細(xì)胞對(duì)BPA誘導(dǎo)的DNA氧化損傷的敏感性。CdCl2預(yù)處理+BPA組與單獨(dú)BPA處理組相比較，5μM或10μM CdC

6、l2預(yù)處理均加重了10μM或50μM BPA引起的細(xì)胞的活力降低、LDH釋放升高、ROS產(chǎn)生增多、彗星參數(shù)（Tail DNA%、TL、TM、OTM）增加、γH2AX的表達(dá)增加、G2期阻滯、TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及PARP表達(dá)升高(P<0.05)；而值得注意的是，與單獨(dú)2μM BPA處理組相比，5μM CdCl2預(yù)處理尚不足以引起細(xì)胞對(duì)2μM BPA致使的DNA損傷的敏感性，上述指標(biāo)均無(wú)顯著學(xué)差異(P>0.05),而10μM CdCl2預(yù)處

7、理則能夠增敏細(xì)胞對(duì)2μM BPA誘導(dǎo)的細(xì)胞基因毒性（P<0.05）。
　　結(jié)論：無(wú)毒劑量5μM或10μM CdCl2濃度預(yù)處理可以增敏NIH3T3細(xì)胞對(duì)BPA的毒性反應(yīng)，加重BPA對(duì)細(xì)胞的DNA損傷，甚至可以讓本來(lái)無(wú)毒的BPA劑量發(fā)揮對(duì)細(xì)胞的基因毒性。CdCl2增敏細(xì)胞對(duì)BPA誘發(fā)的DNA損傷可能與細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的增加有關(guān)。結(jié)果提示，在日常生活中，暴露于鎘可能會(huì)增加機(jī)體對(duì)外界環(huán)境中廣泛存在的毒物如BPA的敏感性，從而進(jìn)一步加重毒