突變大腸癌線粒體DNA轉(zhuǎn)染NIH3T3及LST細(xì)胞的研究.pdf

1、大腸癌是一種涉及許多相關(guān)基因的多因素多階段的惡性腫瘤，實(shí)驗(yàn)表明染色體外存在抑癌因素，維持細(xì)胞的腫瘤特性需要線粒體DNA(mtDNA)的參與。本課題組通過PCR及測序等技術(shù)分析了人大腸癌細(xì)胞株中細(xì)胞線粒體DNA變異，包括突變、缺失、DNA不穩(wěn)定性等，發(fā)現(xiàn)通過SW480，LoVo，HT29細(xì)胞株的mtDNAD-環(huán)區(qū)基因序列測序，檢測出分別有10，9，8位突變點(diǎn)。而且檢測到不同癌細(xì)胞株中檢測到相同的突變位點(diǎn)，如LoVo細(xì)胞與SW480細(xì)胞均有

2、16224位，T-C，16311位，T-C。SW480細(xì)胞與HT29細(xì)胞均有114位，C-T，498位，C-T，16234位，C-T。因此，為了進(jìn)一步研究mtDNA突變與腫瘤發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在聯(lián)系，將大腸癌細(xì)胞突變的mtDNA轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細(xì)胞(NIH3T3)及人大腸側(cè)向發(fā)育性腫瘤細(xì)胞(LST)，觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞的線粒體DNA改變的特點(diǎn)和mtDNA片段在轉(zhuǎn)染細(xì)胞核內(nèi)的整合情況，并進(jìn)一步觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞生物學(xué)行為的改變。旨在初步探討mtDNA突變在大

3、腸癌發(fā)生中的作用。 結(jié)論: 1.轉(zhuǎn)染突變的大腸癌細(xì)胞mtDNA后轉(zhuǎn)染細(xì)胞的mtDNA均可發(fā)生多處的突變位點(diǎn)。 2.通過轉(zhuǎn)染后突變的外源性的mtDNA可以整合到核基因組內(nèi)。 3.突變的mtDNA轉(zhuǎn)染LST細(xì)胞及NIH3T3細(xì)胞后，不影響轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡。 4.mtDNA的突變可能通過影響體細(xì)胞mtDNA的突變和通過外源性mtDNA在核內(nèi)的整合從而影響癌基因或抑癌基因的表達(dá)異常，從而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。