幾類常用外用中藥成份對人皮膚成纖維細胞膠原代謝的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、慢性皮膚潰瘍是臨床常見病，可繼發(fā)或并發(fā)于多種疾病，治療比較困難。在慢性皮膚潰瘍發(fā)病過程中膠原代謝失常起著至關(guān)重要的作用。慢性皮膚潰瘍創(chuàng)面內(nèi)膠原合成能力降低和膠原分解過度，成為創(chuàng)面難愈合的重要原因。臨床常用的外用中藥有四類：祛腐類藥物，如輕粉、紅粉、雄黃、砒石等；活血類藥物，如乳香、沒藥、血竭、三七、琥珀、大黃等；溫補類藥物，如人參、黃芪、鹿茸、肉桂等；斂口生肌類藥物，如爐甘石、珍珠粉、煅石膏等。臨床和動物實驗均證明外用中藥合理配伍運用治

2、療慢性皮膚潰瘍療效顯著。為研究這四類藥物的作用環(huán)節(jié)和機制，本論文以體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞(humanskinfibroblasts，HSFb)為對象，選用這四類藥物臨床常用代表藥物的有效成份：三氧化二砷(祛腐類)、血竭素和乳香水提物(活血類)、鹿茸多肽(溫補類)、水溶性珍珠粉(斂口生肌類)，比較這幾類中藥成份對成纖維細胞膠原代謝的調(diào)節(jié)作用，明確其作用靶點和作用機制，為中醫(yī)外科治療慢性皮膚潰瘍治則、遣方用藥提供科學(xué)實驗依據(jù)。 本

3、文首先對膠原代謝與慢性皮膚潰瘍的相關(guān)性，以及外用中藥治療慢性皮膚潰瘍的研究現(xiàn)狀進行了綜述，為本論文的立題和研究奠定了基礎(chǔ)，并在此基礎(chǔ)上進行實驗研究。 一、研究三氧化二砷(祛腐類)、血竭素和乳香水提物(活血類)、鹿茸多肽(溫補類)、水溶性珍珠粉(斂口生肌類)對體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞增殖和膠原合成的影響。 方法：采用MTT比色法檢測成纖維細胞增殖和羥脯氨酸試劑盒檢測膠原含量。 結(jié)果顯示：1、藥物分別作用于HSFb4

4、8小時后，水溶性珍珠粉在1.25×102～1×103μg/ml，血竭素在5～20μg/ml，乳香水提物在0.64～2×103μg/ml，鹿茸多肽在6.25×10-3～0.4μg/ml濃度范圍內(nèi)對HSFb具有促增殖作用，與對照組比較差異顯著(P＜0.01或P＜0.05)，三氧化二砷在0.16～0.8μg/ml濃度范圍內(nèi)對HSFb增殖具有抑制作用，與對照組比較差異顯著(P＜0.01)。 2、藥物分別作用于HSFb48小時后，水溶性珍

5、珠粉在2.5×102～1×103μg/ml，血竭素高氯酸鹽在2.5～20μg/ml，乳香水提物在0.64～2×103μg/ml，鹿茸多肽在1.56×10-3～0.4μg/ml濃度范圍內(nèi)對HSFb膠原蛋白合成具有促進作用，與對照組比較差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)，三氧化二砷在3.2×10-2～0.8μg/ml濃度范圍內(nèi)對HSFb膠原蛋白合成具有抑制作用，與對照組比較差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)。 水溶性珍珠粉1

6、×103μg/ml、血竭素20μg/ml、乳香水提物2×103μg/ml、鹿茸多肽0.4μg/ml促進增殖和膠原合成作用最明顯，三氧化二砷0.8μg/ml抑制增殖和膠原合成作用最明顯。這些濃度被作為以后的實驗濃度。 二、研究三氧化二砷(祛腐類)、血竭素和乳香水提物(活血類)、鹿茸多肽(溫補類)、水溶性珍珠粉(斂口生肌類)對體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞膠原代謝的影響。 方法：采用酶譜法檢測成纖維細胞分泌的MMPs活性，采用免疫

7、細胞化學(xué)法檢測TIMP-1、TGF-β1蛋白的表達。 結(jié)果顯示：1、酶譜法分析結(jié)果：MMPs活性條帶在SDS-PAGE電泳凝膠上呈藍色背景上的白色透明帶。根據(jù)低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白鑒定，所有的HSFb上清液中均測出比較清晰的兩條帶，分別為：MMP-1(45kD)，MMP-2(62kD)。藥物作用于HSFb48h后，水溶性珍珠粉、鹿茸多肽對HSFb分泌MMP-1、MMP-2活性沒有明顯作用；血竭素對HSFb分泌MMP-1、MMP-2活性

8、有抑制作用，與對照組差異顯著(P＜0.01)；乳香水提物對HSFb分泌MMP-1活性有抑制作用，與對照組差異顯著(P＜0.01)，對MMP-2活性略微有抑制作用，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；三氧化二砷組HSFb分泌MMP-1、MMP-2活性明顯高于對照組(P＜0.01)。 2、免疫細胞化學(xué)法結(jié)果：(1)TIMP-1蛋白主要為胞漿表達。對照組0、6、12、18h，各用藥組0h標(biāo)本，胞漿均淡染，TIMP-1表達量較低，經(jīng)統(tǒng)計上述

9、各組量均無差異(P＞0.05)；水溶性珍珠粉作用6h后TIMP-1表達仍較低，作用12、18h后，TIMP-1表達略有增加，但與對照組無顯著差異(P＞0.05)；血竭素作用6、12、18h后，TIMP-1表達持續(xù)增加，與對照組差異顯著(P＜0.01)；乳香水提物作用6、12、18h后，TIMP-1表達持續(xù)增加，與對照組差異顯著(P＜0.01)，但各時相TIMP-1表達均低于血竭素組(P＜0.01)；鹿茸多肽作用6、12、18h后TIMP

10、-1表達略有增加，但與對照組無顯著差異；三氧化二砷作用6、12、18h后，TIMP-1表達持續(xù)降低，與對照組差異顯著(P＜0.01)。 (2)TGF-β1蛋白主要為胞漿表達。對照組0、6、12、18h，各用藥組0h標(biāo)本，胞漿均淡染，TGF-β1表達量較低，經(jīng)統(tǒng)計上述各組量均無差異(P＞0.05)；水溶性珍珠粉作用6、12、18h后，TGF-β1表達略有增加，但與對照組無顯著差異(P＞0.05)；血竭素作用6、12h后，TGF-β

11、1表達持續(xù)增加，與對照組差異顯著(P＜0.01)，作用18h后，TGF-β1表達比12h有所下降，但與對照組仍差異顯著(P＜0.01)；乳香水提物作用6、12、18h后，TGF-β1表達持續(xù)增加，與對照組差異顯著(P＜0.01)，乳香水提物作用18hTGF-β1表達低于血竭素12h的高表達(P＜0.01)；鹿茸多肽作用6、12、18h后TGF-β1表達略有增加，但與對照組無顯著差異；三氧化二砷作用6、12、18h后，TGF-β1表達持續(xù)

12、降低，與對照組差異顯著(P＜0.01)。 三、結(jié)論：慢性皮膚潰瘍遷延難愈與膠原代謝失常有關(guān)，通過以上兩部分實驗結(jié)果證實，水溶性珍珠粉、血竭素、乳香水提物、鹿茸多肽可促進成纖維細胞增殖和膠原合成，而三氧化二砷抑制成纖維細胞增殖和膠原合成；血竭素、乳香水提物可降低MMPs活性，促進TIMP-1、TGF-β1的表達，水溶性珍珠粉和鹿茸多肽對MMPs活性、TIMP-1、TGF-β1表達無明顯作用，三氧化二砷升高MMPs活性，抑制TIMP

13、-1、TGF-β1的表達。顯示幾種中藥主要成份對成纖維細胞膠原代謝呈現(xiàn)不同的調(diào)節(jié)作用，說明藥物促進慢性皮膚潰瘍愈合的機理可能是不同的，血竭素、乳香水提物可能通過促進膠原合成和減少膠原降解兩方面促進慢性皮膚潰瘍的愈合，水溶性珍珠粉和鹿茸多肽促進慢性皮膚潰瘍的愈合的作用機理可能主要是促進膠原合成作用，而祛腐藥三氧化二砷在本實驗中的作用可能體現(xiàn)了它的“祛腐”作用：通過抑制成纖維細胞增殖和膠原合成，升高MMPs活性，抑制TIMP-1、TGF-β