白血病干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和免疫相關(guān)分子表達(dá)的研究.pdf

1、目的:分離培養(yǎng)急性髓系白血病(acute myeloid leukemia)患者來(lái)源白血病干細(xì)胞(leukemia stem cells),以及非白血病造血干細(xì)胞,檢測(cè)兩者在TGF-βmRNA和IL-10mRNA上是否有差別,探討急性髓系白血病中白血病干細(xì)胞在免疫逃逸方面的表現(xiàn),為進(jìn)一步研究白血病干細(xì)胞及其免疫逃逸機(jī)制提供一點(diǎn)幫助。
　　方法:采用淋巴細(xì)胞分離液分離急性髓系白血病病人和非白血病人骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞,PBS洗滌稀釋后

2、懸浮培養(yǎng)。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)并分選符合熒光抗體標(biāo)記的白血病干細(xì)胞(CD34+CD38-CD123+)及造血干細(xì)胞(CD34+CD38-CD123-),分選后細(xì)胞一部分繼續(xù)培養(yǎng)并鑒定其干細(xì)胞性,一部分提取RNA,RT-PCR檢測(cè)TGF-βmRNA和IL-10mRNA是否表達(dá)及其表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1.形態(tài)學(xué)觀察:新鮮急性髓系白血病病人骨髓單個(gè)核細(xì)胞,多混有少量紅細(xì)胞,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞大小相對(duì)均勻,圓形或類(lèi)圓形,折光性強(qiáng);瑞氏

3、染色可見(jiàn)細(xì)胞大小相對(duì)均勻,核質(zhì)比大;隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞克隆形成,細(xì)胞克隆增多增大,但瑞氏染色可見(jiàn)細(xì)胞分化明顯,細(xì)胞大小差別增大,胞膜多不規(guī)則,有皺褶,核質(zhì)比大小不一。2.共培養(yǎng):未用絲裂霉素處理的基質(zhì)細(xì)胞做飼養(yǎng)層的共培養(yǎng)體系同絲裂霉素處理后的基質(zhì)細(xì)胞做飼養(yǎng)層的共培養(yǎng)體系比較,有更多的鵝卵石細(xì)胞形成區(qū)且細(xì)胞相對(duì)更多。3.流式檢測(cè)分析:骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的CD34標(biāo)記的細(xì)胞比例是動(dòng)態(tài)變化的,CD34+CD38-CD123+細(xì)胞比例同培養(yǎng)

4、時(shí)間成正比。4.RT-PCR:骨髓單個(gè)核細(xì)胞表達(dá)TGF-βmRNA和IL-10mRNA,同一細(xì)胞群中mRNA的表達(dá)TGF-β>IL-10。
　　結(jié)論:
　　1.白血病人骨髓單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)更容易形成細(xì)胞集落,其中可能存在白血病干細(xì)胞。
　　2.本實(shí)驗(yàn)研究提示白血病干細(xì)胞可能存在于CD34+CD38-CD123+細(xì)胞群。
　　3.本實(shí)驗(yàn)研究提示未經(jīng)絲裂霉素處理的基質(zhì)細(xì)胞做飼養(yǎng)層的共培養(yǎng)可以更好的擴(kuò)增干細(xì)胞。