高遷移率族蛋白HMG-17基因第一內(nèi)含子調(diào)控功能的研究.pdf

1、軍事醫(yī)學科學院博士學位論文高遷移率族蛋白HMG17基因第一內(nèi)含子調(diào)控功能的研究姓名：朱旭東申請學位級別：博士專業(yè)：遺傳學指導教師：黃培堂2000.6.1高遷移率族蛋白HMG17基因第一內(nèi)含子調(diào)控功能的研究博十研究生：朱旭自、導師：黃培堂軍事醫(yī)‘學科。學院生物J欄札玎究所，北京10007摘要高遷移率族蛋白(highmobilitygroupproteins)HMG一17通過改變?nèi)旧|(zhì)構(gòu)象，協(xié)助增強某些染色質(zhì)區(qū)域的轉(zhuǎn)錄能力?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在慢性白

2、血病細胞以及惡變的腸道和乳房組織中HMG17的表達量增加3倍，而liHMG一17基因的缺失和子宮肌瘤相關(guān)。這表明HMG17的lF常表達可能對機體具有重要的作用。MichaelBustin等發(fā)現(xiàn)在雞紅細胞的發(fā)育成熟過程中，HMG—17基因5’端區(qū)域包括第一內(nèi)含子中DNaseI超敏感位點會發(fā)生變化，說明HMG17基因的第一內(nèi)含子極有可能參與了該基因的表達調(diào)控過程。本文著重于研究HMG17基因第一內(nèi)含子中具體有哪些元件參與了基因的表達調(diào)控。／

3、7首先從人全血中抽提得到基因組DNA，以此為模板進行PCR，擴增出HMG—17基因第一內(nèi)含子的DNA片段，克隆到T載體并經(jīng)測序表明序列正確。然后，通過含有報道基因蟲熒光素酶的細胞瞬時表達系統(tǒng)觀察HMG17基因第一內(nèi)含子插入報道基因區(qū)域內(nèi)不同位置時所表現(xiàn)出的調(diào)控功能，發(fā)現(xiàn)該序列中含有正反方向的啟動子成份。同時發(fā)現(xiàn)其具有較弱的增強子活性，以及不具有絕緣子類似的增強子阻斷功能。用啟動子預(yù)測工具軟件分析HMG一17基因第一一內(nèi)含子得到正反向各2

4、個啟動子序列。缺失突變試驗證實計算機分析得到的序列中至少有3個確實有比較明顯的啟動子活性。接著以HMG—17基因的反向序列用Blast搜索NCBI的EST庫，找到2條EST序列A1141891和A1253823，分別來自人胎一tL、cDNA文庫和人慢性白血病B細j]色!cDNA文庫，說明在人慢性白血病B細胞和胎心細胞中都存在有HMG一17基因的反義RNA，而且它們的啟動子都是位于HMG—17基因的第一內(nèi)含子中。與此同時，利用帶有蟲熒光素