Exendin-4通過影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號(hào)通路減輕衣霉素誘導(dǎo)的HUVECs凋亡.pdf

1、目的：內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的病理性增加是動(dòng)脈粥樣硬化等血管病變起始和發(fā)展的重要因素。本課題擬探討衣霉素誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）凋亡的機(jī)制，并在此基礎(chǔ)上加用胰升糖素樣肽-1（Glucagon-like peptide-1，GLP-1）受體激動(dòng)劑Exendin-4，研究其對(duì)衣霉素誘導(dǎo)HUVECs凋亡的影響及其機(jī)制。
　　方法：原代培養(yǎng)HUVECs，不同濃

2、度衣霉素（0～20μg/ml）處理HUVECs16h～24h，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率；Hoechst/PI雙染色熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡率；Western blot檢測(cè)衣霉素（10μg/ml）作用下各時(shí)間點(diǎn)（0、8、14、18h）IRE1а、P-IRE1а、JNK、P-JNK、caspase-3蛋白表達(dá)情況。在此基礎(chǔ)上用不同濃度Exendin-4（5～150nmol/L）預(yù)處理細(xì)胞24h，10μg/ml用衣霉素干預(yù)18h，MTT比色法

3、檢測(cè)細(xì)胞存活率；Hoechst/PI雙染色熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡。Exendin-4（50nmol/L）或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑?；切苊撗跄懰幔╰auroursodeoxycholic acid，TUDCA）1mmol/L預(yù)處理細(xì)胞24h后，10μg/ml衣霉素干預(yù)18h，Western blot檢測(cè)IRE1а、P-IRE1а、JNK、P-JNK、caspase-3蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：衣霉素呈濃度和時(shí)間依賴性地降低HUVECs的存

4、活率；隨著衣霉素濃度的增加，HUVECs凋亡和壞死逐漸增加，10μg/ml和15μg/ml衣霉素使細(xì)胞凋亡較明顯，而大于15μg/ml衣霉素則使細(xì)胞壞死率明顯增加；Western blot結(jié)果顯示隨著衣霉素作用時(shí)間的延長(zhǎng)P-IRE1а/IRE1а、P-JNK/JNK及active caspase-3/procaspase-3表達(dá)呈遞增趨勢(shì)；加用不同濃度Exendin-4預(yù)處理HUVECs24h，細(xì)胞存活率較單獨(dú)衣霉素處理組逐漸增高；Ho

5、echst/PI雙染色熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示Exendin-4(100nmo l/L)預(yù)處理較衣霉素單獨(dú)處理，凋亡率減少40％(P<0.01)；Western blot結(jié)果顯示與衣霉素單獨(dú)處理組相比，衣霉素+Exendin-4處理組的P-IRE1а的表達(dá)量下降了23.25%（P<0.01），P-JNK表達(dá)量下降了29.25%（P<0.01），同時(shí)caspase-3活化片段的表達(dá)也下降了22.20%（P<0.01）；進(jìn)一步用1mmol/L

6、 TUDCA預(yù)處理HUVECs24h，10μg/ml衣霉素干預(yù)18h，發(fā)現(xiàn)用TUDCA預(yù)處理與Exendin-4預(yù)處理得到了相似的結(jié)果，P-IRE1а/IRE1а、P-JNK/JNK及active caspase-3/procaspase-3比例均較衣霉素單獨(dú)處理組減少（P<0.01）。
　　結(jié)論：衣霉素能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡通路IRE1а/JNK/caspase-3誘導(dǎo)HUVECs凋亡，而Exendin-4可以減少衣霉素誘導(dǎo)的HU