CDglyTK融合基因聯(lián)合芹黃素對乳腺癌細胞的殺傷作用.pdf

1、第一軍醫(yī)大學碩士學位論文CDglyTK融合基因聯(lián)合芹黃素對乳腺癌細胞的殺傷作用姓名：盛新華申請學位級別：碩士專業(yè)：普通外科學指導教師：卿三華20060520摘要2、觀察芹黃素對乳腺癌細胞體外侵襲能力的抑制作用及其對乳腺癌細胞增殖和細胞周期的影響。3、觀察芹黃素預處理對CD出yTK融合基因系統(tǒng)殺傷乳腺癌細胞旁觀者效應的調控以及聯(lián)合應用這兩種處理方法對乳腺癌細胞增殖的抑制作用。通過上述實驗研究，為將這兩種治療方法聯(lián)合應用于乳腺癌治療的體內抑

2、瘤效應研究奠定基礎。方法I、細菌內同源重組法制備含CD百yTK融合基因的重組腺病毒。胞嘧啶脫氨酶和胸苷激酶融合基因CDglyTK自逆轉錄病毒載體質粒pWZLaeoCDglyTK中切出，亞克隆至腺病毒穿梭質粒中，形成轉移質粒pAdtrackCMVCDglyTK，將之PmeI酶切線性化后與腺病毒基因組質粒pAde姆l共轉化BJ5183菌，抽提重組體腺病毒質粒DNA，PacI酶切后轉染人胚腎293細胞包裝成腺病毒顆粒，采用PCR方法對重組體腺

3、病毒進行鑒定，利用綠色熒光蛋白報告基因對病毒滴度和感染效率進行測定，WesternBlot檢測感染重組腺病毒的人乳腺癌細胞MCF7中有無目的基因的表達。2、腺病毒載體介導的CDglyTK融合基因系統(tǒng)對乳腺癌細胞的殺傷作用及旁觀者效應。重組腺病毒制備成功后，按20pfu／細胞的比率將重組腺病毒接種于人乳腺癌細胞MCF7，給予不同濃度的前藥(GCV和5FC)處理。設GCV組、5FC組、GCV5FC組及陰性對照組，觀察各組乳腺癌細胞的生長情況