小鼠附植前胚胎微環(huán)境對人宮頸癌細胞（HeLa）的重編程作用.pdf

1、過去認為惡性腫瘤細胞可以入侵各種組織并且注入到成年動物體內會產(chǎn)生腫瘤。但是最近研究證明注入早期囊胚后癌細胞的惡性表型可以被逆轉為正常狀態(tài)。這說明癌細胞的惡性表型并非其固有的特征，更可能與其周圍的環(huán)境有關，從微環(huán)境的角度來尋找抑制腫瘤的方法日益成為腫瘤研究的焦點。本試驗建立聚合胚、注射胚兩種體外發(fā)育模型，并結合實時熒光定量Real-time PCR技術來研究附植前小鼠胚胎微環(huán)境對人宮頸癌HeLa細胞的重編程作用。研究結果如下：

2、1、聚合胚的制作收集昆明白小鼠的8-細胞胚胎和桑椹胚，消化透明帶后與50-100個HeLa細胞置于同一凹窩中，培養(yǎng)30h-50h。聚合30h后大多數(shù)囊胚已經(jīng)發(fā)育到桑椹胚后期或早期囊胚，囊胚率為70.3％，40h后囊胚率為78.9％，50h后囊胚率為84.6％。 2、注射胚的制作本試驗選取充分擴張的小鼠囊胚，共注射97枚(每個胚胎注射15-20個HeLa細胞)，經(jīng)24h的培養(yǎng)重新出現(xiàn)膨大囊胚腔的有73枚，囊胚孵化率為75.3％。

3、 3、Real-time PCR檢測嵌合體中人宮頸癌易感基因mRNA表達根據(jù)人和小鼠β-actin基因cDNA序列的差別，利用Oligo 6.0設計人特異β-actin基因引物。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)人β-actin在聚合胚中有表達，說明HeLa細胞可以與早期鼠胚發(fā)生聚合。結果表明，在聚合胚和注射胚中，HeLa細胞特異表達的c-myc基因、c-erbB2基因的mRNA產(chǎn)物都顯著降低(P<0.01)。成年人宮頸癌細胞可以與附植前鼠胚微環(huán)境中