人參總皂苷聯(lián)合大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞對高糖損傷 INS-1細胞的作用.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩68頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、 目的:通過連續(xù)性高糖刺激大鼠胰島β細胞株INS-1細胞,造成細胞活力及細胞功能的損傷后,撤去高糖環(huán)境。在不同藥物濃度人參總皂苷(TSPG)干預下,通過Transwell共培養(yǎng)小室,與大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs)間接共培養(yǎng),觀察各組 INS-1 細胞細胞功能相關的關鍵轉錄因子肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物 A 基因(MafA)、胰腺十二指腸同源盒-1(PDX-1)的表達變化,基礎胰島素分泌和葡萄糖刺激的胰島素分泌情況,及共培養(yǎng)階

2、段細胞外液中轉化生長因子-β(TGF-β)的含量,以確定INS-1細胞與大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞間接共培養(yǎng)或者在人參總皂苷干預下大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞與INS-1細胞間接共培養(yǎng)能否修復高糖損傷的INS-1細胞及可能機制。方法:體外培養(yǎng)大鼠胰島β細胞株INS-1細胞和大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs),給予INS-1細胞連續(xù)性高糖刺激72小時后,停止高糖刺激,并通過Transwell共培養(yǎng)小室與BM-MSCs進行間接共培養(yǎng)。實驗分為6組:1

3、.正常對照組:未經(jīng)高糖刺激的正常INS-1細胞;2.INS-1 細胞損傷模型對照組:經(jīng)連續(xù)性高糖刺激的 INS-1 細胞;3. 無TSPG共培養(yǎng)組:高糖刺激后的INS-1細胞+BM-MSCs共培養(yǎng)組;4. 50mg/L TSPG共培養(yǎng)組: 50mg/L TSPG +高糖刺激后的INS-1細胞+BM-MSCs;5. 100mg/L TSPG共培養(yǎng)組:100mg/L TSPG+高糖刺激后的INS-1細胞+BM-MSCs ;6. 200mg/

4、L TSPG共培養(yǎng)組:200mg/L TSPG+高糖刺激后的INS-1細胞+BM-MSCs。培養(yǎng)96小時。培養(yǎng)結束后,分別提取各組INS-1細胞總RNA和蛋白,RT-PCR檢測MafA、PDX-1mRNA的表達水平;WB檢測 PDX-1的蛋白表達變化;ELISA檢測各組INS-1細胞基礎胰島素分泌、葡萄糖刺激的胰島素分泌及共培養(yǎng)階段細胞外液中TGF-β含量。結果:(1)INS-1細胞高糖損傷模型的建立:與5.6mmol/l葡萄糖濃度的對

5、照組相比,20、30、40mmol/l濃度的葡萄糖處理后,各組細胞的OD值均有下降。參考國內(nèi)外相關研究,選取在刺激時間為72h,對INS-1細胞功能亦有明顯損傷作用的30mmol/L的葡萄糖濃度作為建模濃度。(2)TSPG對INS-1細胞的毒性作用:400及800mg/L TSPG干預后,細胞OD值明顯下降,與正常對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05),提示這一濃度范圍的TSPG能抑制INS-1細胞的活力與增殖。故本實驗選取50、

6、100及200mg/L的TSPG濃度為干預濃度。(3)各組INS-1細胞MafA、PDX-1 mRNA的表達情況:與正常對照組比較,高糖損傷模型組INS-1細胞MafA及PDX-1 mRNA表達量均有降低,差異有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)。與損傷對照組相比,200mg/L TSPG干預的共培養(yǎng)組 INS-1細胞MafA mRNA表達增強;100mg/L及200mg/L TSPG干預共培養(yǎng)組PDX-1 mRNA表達增加。(4)各組INS-

7、1細胞PDX-1蛋白的表達:與正常對照組相比,高糖損傷模型組的各組 INS-1 細胞PDX-1 蛋白的表達均有下降。與損傷模型對照組比較,共培養(yǎng)組 PDX-1 蛋白表達增加。與無 TSPG 干預的共培養(yǎng)組比較,200mg/L TSPG 干預組PDX-1蛋白表達增加。(5)各組細胞共培養(yǎng)階段細胞外液中TGF-β的含量:與正常對照組相比,高糖損傷對照組細胞外液中 TGF-β含量無明顯變化。與損傷模型對照組比較,共培養(yǎng)組細胞外液中 TGF-β

8、含量明顯增加。(6)各組INS-1細胞基礎胰島素分泌及葡萄糖刺激的胰島素分泌情況:與正常對照組相比,高糖損傷模型組INS-1細胞基礎胰島素和葡萄糖刺激的胰島素分泌量均減少。與損傷對照組比較,共培養(yǎng)各組INS-1細胞基礎胰島素和葡萄糖刺激的胰島素分泌量增加。與無TSPG共培養(yǎng)組比較,不同濃度的TSPG干預共培養(yǎng)組基礎胰島素的分泌量無明顯差異,而100和200 mg/L TSPG干預共培養(yǎng)組葡萄糖刺激的胰島素分泌量增加。結論:(1)BM-M

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論