荷斯坦奶牛細(xì)胞因子基因的克隆、表達(dá)及重組蛋白的應(yīng)用.pdf

1、本文從荷斯坦奶牛的外周血淋巴細(xì)胞中經(jīng)ConA刺激提取總RNA,通過(guò)RT-PCR的方法克隆了IL-2、IL-6和GM-CSF三個(gè)基因，連接載體T-easy,測(cè)序結(jié)果顯示：IL-2與已登錄的基因序列完全相同；IL-6和GM-CSF與GneBank中的序列存在點(diǎn)變異。氨基酸序列分析表明三種細(xì)胞因子α螺旋在50％以上，有1-2個(gè)糖基化位點(diǎn)。文章將豚鼠隨機(jī)分為17組，每組5只，將表達(dá)的重組蛋白免疫各組，每隔2周免疫一次，共免疫3次。豚鼠試驗(yàn)結(jié)果表

2、明，與生理鹽水對(duì)照組比較，免疫組血清IgG抗體水平顯著升高，T細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著增強(qiáng)，抗原特異性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DHT)強(qiáng)烈，Th1型和Th2型細(xì)胞因子表達(dá)量都有不同程度的升高。通過(guò)ELISA試驗(yàn)、T細(xì)胞增殖試驗(yàn)、中和抗體試驗(yàn)、遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)以及半定量PCR試驗(yàn)檢測(cè)三種細(xì)胞因子作為分子免疫佐劑與VP1聯(lián)用的效果，試驗(yàn)結(jié)果表明用VP1免疫，GM-CSF作為分子佐劑的效果最好；IL-2比IL-6的佐劑效果好；兩種細(xì)胞因子聯(lián)合的佐劑效果比單