齊墩果酸經(jīng)TBX20-PPARγ-PON2通路抑制ox-LDL誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞損傷.pdf

1、目的：復(fù)制氧化性低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotein，ox-LDL）誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）氧化損傷模型，從TBX20/PPARγ/PON2信號(hào)通路的角度探究齊墩果酸（oleanolic acid，OA）對(duì)該模型的保護(hù)作用。
　　方法：CCK-8篩選ox-LDL作用24h后損傷HUVECs的合適濃

2、度、OA細(xì)胞毒性以及OA預(yù)保護(hù)時(shí)間和濃度。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組為：正常對(duì)照組、ox-LDL模型組、OA藥物組（10，20，40μmol/L）；酶化學(xué)方法檢測(cè)各分組細(xì)胞中過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、一氧化氮（NO）、總一氧化氮合酶（NOS）的活性或含量；電子自旋共振（ESR)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）自由基和一氧化氮（NO)自由基的生成量；Real-time PCR和Western bolt技術(shù)檢測(cè)TBX20、P

3、PARγ、PON2mRNA和蛋白的表達(dá)；脂質(zhì)體瞬時(shí)siRNA轉(zhuǎn)染以及加入抑制劑使細(xì)胞中蛋白表達(dá)沉默，Western blot檢測(cè)TBX20、PPARγ、PON2蛋白表達(dá)變化。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS軟件。
　　結(jié)果：根據(jù)IC50，實(shí)驗(yàn)選取100μg/ml ox-LDL誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞損傷模型；CCK-8結(jié)果顯示：與模型組相比，10、20、40μmol/LOA預(yù)處理16h后，細(xì)胞存活率顯著升高，且有量效依賴(lài)關(guān)系；酶化學(xué)方法檢測(cè)

4、表明：與正常組相比，模型組中CAT、 GSH-PX、NOS活性及NO含量明顯降低；而預(yù)先給予不同濃度OA預(yù)處理16h后，可量效依賴(lài)性提高CAT、GSH-PX、NOS活性，增加NO含量（與模型組相比，P<0.05）。ESR結(jié)果顯示：模型組中ROS含量明顯增高，而NO含量降低；OA(10、20、40μmol/L)預(yù)處理16h后，此時(shí)各組細(xì)胞中ROS含量與模型組比會(huì)顯著降低，而NO含量會(huì)升高（P＜0.05）。RT-PCR和蛋白免疫印跡法檢測(cè)結(jié)

5、果表明：模型組中TBX20、PPARγ、PON2 mRNA和蛋白表達(dá)水平較正常組顯著降低，而各劑量OA組中這三者 mRNA和蛋白表達(dá)水平均較模型組顯著升高，且隨OA劑量的增加對(duì)TBX20、PPARγ、PON2表達(dá)的激活作用逐漸增強(qiáng)，呈劑量依賴(lài)關(guān)系(P<0.05)；T-bx-siRNA轉(zhuǎn)染HUVECs細(xì)胞后，熒光顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染率可達(dá)90％，Western bolt結(jié)果顯示與TBX20未沉默組相比，TBX20、PPARγ、PON2表達(dá)量明顯

6、降低（P<0.05）;在OA預(yù)處理之前提前給予PPARγ抑制劑GW9662（10μmol/L）孵育2h，Western blot結(jié)果顯示PPARγ、PON2蛋白水平均明顯降低(P<0.05)，而TBX20蛋白表達(dá)量幾乎沒(méi)有變化。
　　結(jié)論：100μg/mL ox-LDL抑制TBX20/PPARγ/PON2信號(hào)通路加速HUVECs氧化損傷；而OA通過(guò)激活TBX20/PPARγ/PON2信號(hào)通路保護(hù)ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs損傷。