HB-EGF轉(zhuǎn)基因小鼠的建立和功能研究.pdf

1、擴張性心肌癥是最常見的心臟疾病之一，是導致心臟衰竭的第三大常見原因。選擇性ErbB2剔除的小鼠為研究ErbB2受體特異的抑制劑赫賽汀所引起的擴張性心肌病和心力衰竭提供了動物模型?，F(xiàn)已證實ErbBs信號系統(tǒng)在胚胎期心臟的發(fā)育過程中和維持成體心臟的功能方面都具有重要的作用。HB-EGF是ErbB受體的主要配體之一，HB-EGF通過ErbB受體介導的信號通路在維持心臟的正常功能和心臟瓣膜的發(fā)育中起非常重要的作用。 我們建立了動物模型來

2、進一步闡明HB-EGF和ErbB受體在心臟功能和發(fā)育中的作用。本論文分為兩個部分，第一部分：建立HB-EGF的轉(zhuǎn)基因動物模型。第二部分：利用轉(zhuǎn)基因動物模型研究HB-EGF的功能。 首先我們構(gòu)建了α-MHC-HB-EGF表達載體。為了提高HB-EGF在小鼠體內(nèi)的表達，將HB-EGF的編碼序列插入到在小鼠心臟組織中特定表達的α-MHC啟動子的下游，然后酶切成線性DNA。把構(gòu)建的線性α-MHC-HB-EGF注射到受精卵的雄原核中，使其

3、發(fā)育成攜帶有HB-EGF的轉(zhuǎn)基因小鼠。通過PCR的方法鑒定轉(zhuǎn)基因的首建鼠。我們得到了兩只HB-EGF陽性的首建鼠。Westernblotting發(fā)現(xiàn)16號小鼠中HB-EGF在心臟中的表達與同窩陰性對照小鼠相比蛋白表達明顯增加。 取HB-EGF在心臟中特異性高表達的16號陽性轉(zhuǎn)基因小鼠的F1代與同窩陰性對照小鼠，腹腔注射BrdU(每kg體重10ml)，2h后取出心臟，固定于4％多聚甲醛中，做石蠟切片，用小鼠生物素標記的BrdU抗體