睪丸內(nèi)注射和體內(nèi)電穿孔法建立轉(zhuǎn)基因小鼠的實驗研究.pdf

1、轉(zhuǎn)基因動物在醫(yī)學、生命科學、生物制藥等領域有著廣泛的研究和應用前景，因此科學家們一直在探索一種更簡便易行、經(jīng)濟實用而又高效的轉(zhuǎn)基因方法。近幾年來，隨著科學技術(shù)的發(fā)展，體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移已成為用于基因治療、生物學分析等領域非常受歡迎的一種技術(shù)，體內(nèi)電穿孔技術(shù)就是其中之一。 精原干細胞是精子的前體細胞，是雄性動物中唯一可以自我增殖、更新并向下一代傳遞遺傳信息的細胞類型。對精原干細胞的操作和修飾在建立轉(zhuǎn)基因動物模型、制備乳腺生物反應器等方面

2、有重要意義。 本研究結(jié)果顯示： (1)經(jīng)500～900V/cm的體內(nèi)高壓電穿孔之后，可造成SPF級KM雄鼠睪丸生精小管內(nèi)生殖細胞的不可逆損傷，最后導致SPF級KM雄鼠生殖能力的喪失；此外，睪丸的重量、附睪精子活力、睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)與正常小鼠睪丸相比有顯著的降低和改變(p＜0.05)。 (2)SPF級KM雄鼠睪丸經(jīng)體內(nèi)低壓電穿孔(30～110V/cm)2周后，雖然會造成KM雄鼠睪丸的一定損傷，但這種損傷是可逆的，睪丸生

3、精小管經(jīng)一定時間的恢復后仍有新的精子細胞的形成，雄鼠仍有生殖能力，并從附睪精子活力評估、生精小管損傷程度以及與雌鼠的交配試驗中篩選出1組適合體內(nèi)電穿孔的參數(shù)組合。 (3)從不同處理的四組動物的F1仔鼠中各取20只抽提鼠尾基因組DNA以進行PCR-Southern檢測，結(jié)果顯示：A組的外源基因在F1中的整合率(25％)顯著高于B組(5％)、C組(10％)、D組(0％)，同時也比顯微注射法(豬：整合率10％；綿羊：整合率為1.4％-