凝集素修飾苦參堿納米粒的制備工藝研究及對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞作用的初步評(píng)價(jià).pdf

1、　　目的：結(jié)腸癌是消化道常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,晚期結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移者無(wú)法手術(shù),而傳統(tǒng)放化療缺乏針對(duì)性,產(chǎn)生的嚴(yán)重毒副作用常常導(dǎo)致治療失敗。本課題選擇苦參堿(Mt)作為模型藥物,以聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)為載體材料,在包載 Mt 的納米粒表面結(jié)合能識(shí)別結(jié)腸腫瘤細(xì)胞的麥胚凝集素(WGA),使藥物對(duì)癌細(xì)胞發(fā)揮特異殺傷作用,為口服結(jié)腸癌靶向給藥系統(tǒng)的研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：(1)苦參堿納米粒(Mt-NPS)制備工藝的研究 采用復(fù)乳化

2、-溶劑揮發(fā)法制備苦參堿納米粒,通過(guò)星點(diǎn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),以粒徑、粒度分布、電位、包封率和載藥量為評(píng)價(jià)指標(biāo)篩選最佳制備工藝。(2)麥胚凝集素修飾苦參堿納米粒(WGA-Mt-NPs)的制備工藝研究 采用碳二亞胺法制備 WGA-Mt-NPs,通過(guò)均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì),以粒徑、粒度分布、電位和修飾率為評(píng)價(jià)指標(biāo)篩選最佳制備工藝,透射電鏡觀察修飾前后粒徑大小和形態(tài)的變化。(3)結(jié)腸癌細(xì)胞(HT-29)生長(zhǎng)曲線的測(cè)定和細(xì)胞毒作用研究 采用四唑鹽比色法(MTT),比較

3、WGA-Mt-NPs與Mt-NPs對(duì)結(jié)腸癌HT-29的細(xì)胞毒作用,分別考察各組在固定培養(yǎng)時(shí)間抑制 HT-29 細(xì)胞的量-效關(guān)系,固定給藥濃度各組抑制HT-29細(xì)胞的時(shí)-效關(guān)系,及各組不同濃度對(duì)HT-29細(xì)胞毒性作用,以O(shè)D值為指標(biāo)研究Mt-NPs用WGA修飾前后對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。
　　結(jié)果：通過(guò)星點(diǎn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法確定出Mt-NPS的最佳制備工藝為：PLGA與Mt 的比例為 0.594：1,轉(zhuǎn)速 815rpm

4、/min,PVA 濃度為 0.46%；均勻?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)確定出WGA-Mt-NPS的最佳制備工藝為：碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDAC/NHS)濃度比為2.8：0.12,凝集素加入量3mg/25ml,孵化14h；MTT法表明WGA-Mt-NPS和Mt-NPS對(duì)HT-29細(xì)胞均產(chǎn)生抑制作用,而WGA-Mt-NPS對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的抑制作用強(qiáng)于Mt-NPS。
　　結(jié)論：通過(guò)對(duì)Mt-NPs、WGA-Mt-NPS制備工藝研究和對(duì)結(jié)腸癌HT-29