VEGF基因修飾的骨髓間充質干細胞移植治療腦梗塞大鼠的實驗研究.pdf

1、目的：構建VEGF基因表達載體，并轉染Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠的骨髓間充質干細胞，觀察和檢測VEGF基因的轉染效果及其在MSCs中的表達，同時研究靜脈移植轉染VEGF基因的MSCs對腦梗塞大鼠的治療作用。
　　 方法：利用基因重組技術，用 EcoR I對含有目的基因VEGFA的質粒進行酶切，獲得VEGFA基因片段，將其插入pIRES2-EGFP載體構建pIRES2-EGFP-VEGFA真核表達載體，經酶切、測

2、序鑒定正確，采用脂質體轉染技術將pIRES2-EGFP-VEGFA導入MSCs，熒光顯微鏡下觀察及流式細胞術檢測其轉染率，Western Blot檢測VEGF基因的蛋白表達；另采取改良線栓法制作SD大鼠左側大腦中動脈栓塞模型（MCAO），隨機分為VEGF-MSCs組、MSCs組、PBS組、Model組，24h后前三組大鼠分別經尾靜脈注射1ml VEGF-MSCs、MSCs、PBS，Model組不做任何處理。細胞移植7d后TTC染色觀察模

3、型大鼠腦梗死面積，免疫組織化學法檢測模型大鼠腦梗塞區(qū)域Ang-2、CD34的表達，并于細胞移植1d和7d對各組大鼠進行神經功能缺損評分。
　　 結果：(1)經酶切、測序鑒定證實成功構建pIRES2-EGFP-VEGFA真核表達載體，其中插入有656bp的VEGFA cDNA，將其轉染MSCs后48h在熒光顯微鏡下觀察，可見帶綠色熒光的細胞，經計算得到轉染率為(34±3.6)％，進一步采用流式細胞術測定轉染率為(37±2.8)％。

4、Western Blot檢測證實VEGF基因在轉染后的MSCs中呈陽性表達；(2)NSS：細胞移植1天后，各組間均無明顯差異，差異無統計學意義（P＞0.05）；7天后，VEGF-MSCs組、MSCs組較PBS組、Model組低，差異有統計學意義（P＜0.05），其中VEGF-MSCs組較MSCs組更低，且差異有統計學意義（P＜0.05），Model組與PBS組相比差異無統計學意義（P＞0.05）；(3)TTC檢測腦梗死體積百分比：VEG

5、F-MSCs組、MSCs組較PBS組、Model組低，差異有統計學意義（P＜0.05），其中VEGF-MSCs組較MSCs組更低，且差異有統計學意義（P＜0.05），PBS組與Model組相比差異無統計學意義（P＞0.05）。(4)免疫組化染色檢測腦梗塞區(qū)域Ang-2、CD34表達：VEGF-MSCs組、MSCs組較PBS組、Model組高，差異有統計學意義（P＜0.05），其中VEGF-MSCs組較MSCs組更高，且差異有統計學意義（