左氧沙星與磷霉素聯(lián)合對(duì)金黃色葡萄球菌的防耐藥變異濃度及用PK-PD參數(shù)預(yù)測(cè)體內(nèi)細(xì)菌耐藥變異的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]評(píng)價(jià)左氧沙星與磷霉素聯(lián)用對(duì)金黃色葡萄球菌的聯(lián)合抗菌效應(yīng)。了解左氧沙星單用及與磷霉素聯(lián)用的殺菌曲線特點(diǎn)。研究左氧沙星單用及其與磷霉素聯(lián)合使用對(duì)金黃色葡萄球菌的防耐藥變異濃度（MPC）的變化。在以上研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)金黃色葡萄球菌感染的兔組織籠模型探討用PK/PD參數(shù)預(yù)測(cè)金黃色葡萄球菌的體內(nèi)耐藥變異。
　　 [方法]（1）采用棋盤(pán)法設(shè)計(jì)，微量肉湯稀釋法測(cè)定不同濃度組合的抗菌藥物對(duì)15株甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌（MssA）

2、和15株甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌（MRSA）的最低抑菌濃度（MIC），并計(jì)算聯(lián)合抑菌指數(shù)（FICI）判定聯(lián)合效應(yīng)。（2）選取3株MSSA ATCC29213、臨床分離菌SA99、SARN450（實(shí)驗(yàn)室菌株）和1株臨床分離的MRSAB6177，采用菌落計(jì)數(shù)法對(duì)不同濃度的左氧沙星或磷霉素單用及兩藥聯(lián)合對(duì)3株MSSA和1株MRsA進(jìn)行體外殺菌實(shí)驗(yàn)。（3）采用瓊脂二倍稀釋法測(cè)定左氧沙星及磷霉素對(duì)10株MsSA和10株MRsA的MIC和防耐藥

3、變異濃度，計(jì)算耐藥變異頻率，然后聯(lián)合兩種藥物采用瓊脂稀釋法測(cè)定對(duì)上述菌株的MPC，計(jì)算耐藥變異頻率和選擇指數(shù)（SI-MPC/MIC）。（4）建立金黃色葡萄球菌感染的兔組織籠模型，選取MIC相同（0.125 μg/ml），MPc不同的2株臨床分離的金黃色葡萄球菌SA99、SA6648（分別為0.6，1.8 μg/ml）在兔組織籠中造成感染，每組21只家兔，分別給予不同劑量的左氧沙星灌胃治療5天，每日給藥前和給藥后2、4、6、8、10h抽取

4、兔組織籠內(nèi)的組織液，采用HPLC法測(cè)定組織液中左氧沙星藥物濃度，進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)測(cè)定，計(jì)算PK/PD參數(shù)，監(jiān)測(cè)耐藥菌的產(chǎn)生及耐藥變異頻率。
　　 [結(jié)果]（1）左氧沙星與磷霉素聯(lián)合用藥后，對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC50顯著降低，F(xiàn)ICI分布：15株MSSA的FICI分布：FICI<0.5占40％；0.54為0。15株MRSA的FICI分布：FICI≤0.5占73.8％；0.5

5、％；FICI>4為0。（2）左氧沙星的殺菌曲線表現(xiàn)出濃度依賴性，磷霉素的殺菌曲線表現(xiàn)出非濃度依賴性。兩藥1/4MIC濃度單用時(shí)雖然均無(wú)法抑制MssA的生長(zhǎng)，而兩藥亞抑菌濃度聯(lián)合使用后即表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)和殺菌效應(yīng)。兩藥4MIC、8MIC聯(lián)合時(shí)對(duì)MRSA表現(xiàn)出殺菌效應(yīng)。（3）左氧沙星與磷霉素單用對(duì)10株MSSA和10株MRSA的MPC/MIC分別是4～64，4～16，聯(lián)合用藥后MPC/MIC分別是2～4，1～4。聯(lián)合用藥較單獨(dú)用藥MPC/MI

6、C下降2～16倍，耐藥頻率較前下降10～102。（4）1）SA99組動(dòng)物共有11只分離出耐藥株，SA6648組有13只分離出耐藥株。2）當(dāng)兩組AUC/MPC分別大于21.4、18.2，Cmax/MPC分別大于1.7、1.12時(shí)，可以在將細(xì)菌清除同時(shí)避免耐藥變異株產(chǎn)生，低于上述值時(shí)有耐藥變異體產(chǎn)生。當(dāng)藥物濃度在整個(gè)給藥期間低于MIC時(shí)無(wú)耐藥變異產(chǎn)生。3）耐藥變異體的靶位變異位點(diǎn)主要是gr1A基因的ser80-phe位點(diǎn)突變和gyrA基因的

7、Ser84→Leu突變。AUC/MPC、Cmax/MPC比AUC/MIC、Cmax/MIC在預(yù)測(cè)金黃色葡萄球菌對(duì)左氧沙星耐藥時(shí)更穩(wěn)定，更準(zhǔn)確。T>MPC、Tmsw與左氧沙星耐藥變異產(chǎn)生的關(guān)系不確定。
　　 [結(jié)論]體外左氧沙星與磷霉素聯(lián)用對(duì)30株金黃色葡萄球菌主要為協(xié)同和無(wú)關(guān)作用。亞抑菌濃度的左氧沙星與磷霉素聯(lián)合對(duì)MSSA即可出現(xiàn)協(xié)同殺菌效應(yīng)。左氧沙星聯(lián)合磷霉素對(duì)MRSA也表現(xiàn)出顯著的殺菌活性。聯(lián)合用藥較單獨(dú)用藥對(duì)金黃色葡萄球菌