豬巨細胞病毒感染豬多器官microRNA表達譜的研究.pdf

1、嚳譬宦墊絲控盟⑧』就￡潮博一_l：學(xué)位論文麴黧嘲誦黼醐辨蓮粼瓣黜㈣辨黼麟醚懶瓣劉驍206=蘋Ii月中文摘要豬巨細胞病毒(Porcinecytomegalovirus，PCMV)屬于巨細胞病毒屬，皰疹病毒科，B皰疹病毒亞科。豬巨細胞病毒具有二十面體結(jié)構(gòu)并具有雙鏈線狀DNA基因組。PCMV已經(jīng)在世界各地廣泛流行，包括中國、英國、德國、美國、日本在內(nèi)的國家都已證實了PCMV的流行，并對養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重威脅。PCMV是一種免疫抑制病毒，主要抑制T

2、淋巴細胞及巨噬細胞系統(tǒng)免疫功能，但其對免疫系統(tǒng)抑制的機制并不明確。為了研究PCMV對宿主免疫器官功能的潛在影響，我們使用轉(zhuǎn)錄組芯片技術(shù)對PCMV感染的重要豬中樞免疫器官胸腺的轉(zhuǎn)錄物組進行了檢測，并使用健康豬胸腺作為對照。本研究結(jié)果表明，相對正常豬胸腺PCMV感染的胸腺中5582種基因發(fā)生顯著差異性表達，其中2161種基因表達顯著上調(diào)，而3421種基因表達顯著下調(diào)。本研究使用實時熒光定量PCR對13種顯著差異性表達的免疫相關(guān)基因進行了檢測

3、，并使用Westernblot技術(shù)進一步對這些基因表達的蛋白進行了驗證。對PCMV感染胸腺中差異性表達基因的基因功能注釋分析(Geneontologyanalysis)、基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析(Geneinteractionnetworkanalysis)、及K_EGG通路分析結(jié)果均表明，PCMV感染廣泛影響包括免疫系統(tǒng)、細胞代謝過程、TGF13信號通路、淋巴受體信號通路、TNF—a信號通路在內(nèi)的大量免疫相關(guān)信號通路。MicroRNA(miR

4、NA)是種在真核生物中廣泛存在的長度為1824nt的非編碼RNA。而成熟miRNAs對發(fā)育、造血作用、細胞分化、細胞凋亡、增殖、脂肪代謝、癌癥、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等諸多生命過程都發(fā)揮著重要調(diào)控作用。為了研究miRNA在PCMV感染免疫抑制過程中發(fā)揮的調(diào)控功能，本研究利用lllumina／Solexa技術(shù)對感染PCMV的豬肺臟、肝臟、胸腺、腎臟、脾臟及健康豬對應(yīng)器官進行高通量測序，并對rniRNA表達譜進行了綜合分析。測序結(jié)果顯示，胸腺、肺臟、腎臟

5、、脾臟及肝臟miRNA表達譜中共發(fā)現(xiàn)601種成熟miRNAs表達，其中有295種為未錄入miRNA數(shù)據(jù)庫的新miRNAs。本研究從PCMV感染的多種器官和多種正常器官miRNA高通量測序表達譜中挑選12種miRNAs使用Stem100pRTqPCR檢測手段對其表達進行驗證，結(jié)果顯示12種指定miRNA高通量測序與熒光定量PCR檢測結(jié)果基本一致?；蚬δ茏⑨尫治?GeneOntologv’GO)結(jié)果表明PCMV感染器官中顯著差異性表達的m