薏仁多糖的提取、純化及誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、薏仁(AdlaySeed)是禾木科植物薏米的干燥成熟種仁，是常用的中藥，又是普遍、常吃的食物，作為一種藥食兼用的植物，其中的活性成分薏仁多糖具有降血糖、抗氧化等作用。本研究以薏仁為原料，研究薏仁多糖的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)以及薏仁多糖誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的作用，為拓展薏米多糖的應(yīng)用提供理論依據(jù)和基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　本研究旨在探討薏仁多糖誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的作用。通過水提醇沉法提取粗的薏仁多糖，再通過脫蛋白質(zhì)，脫色，透析，DEAE-52離子交換柱

2、層析，葡聚糖凝膠過濾層析得到薏仁多糖組分。采用紫外全波長掃描和高效液相色譜檢測，結(jié)果顯示薏仁多糖中不含核酸、蛋白等雜質(zhì);檢測多糖的比旋光度為+180;多糖經(jīng)糖醇乙酸酯衍生化后采用氣相色譜法對其單糖組成進行研究，薏仁多糖主要由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖組成;采用凝膠過濾層析法測定薏仁多糖相對分子質(zhì)量為1.2×104;紅外光譜法對結(jié)構(gòu)進行初步分析顯示薏仁多糖是酸性β-D-吡喃葡萄糖。
　　將薏仁多糖作用于A549細(xì)胞檢測結(jié)

3、果為:采用MTT測定A549細(xì)胞的存活率，MTT測得薏仁多糖對A549細(xì)胞有明顯的生長抑制作用;掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，掃描電子顯微鏡觀察到測試組A549細(xì)胞產(chǎn)生凋亡小體;流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率，流式細(xì)胞儀分析薏仁多糖處理導(dǎo)致A549細(xì)胞S期阻滯，并產(chǎn)生凋亡峰，凋亡率與多糖濃度呈正相關(guān);用激光共聚焦顯微鏡分析線粒體膜電位的變化，分析顯示細(xì)胞的線粒體膜電位下降;反轉(zhuǎn)錄PCR測定半胱氨酰天冬氨酸酶-3和半胱氨酰天冬氨酸酶-9兩種基

4、因相對表達量，反轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)果表明與對照組比較，測試組半胱氨酰天冬氨酸酶-3和半胱氨酰天冬氨酸酶-9基因表達量上升;免疫印跡實驗分析半胱氨酰天冬氨酸酶-3和半胱氨酰天冬氨酸酶-9兩種蛋白的相對表達量，免疫印跡實驗分析半胱氨酰天冬氨酸酶-3和半胱氨酰天冬氨酸酶-9兩種蛋白的相對表達量也提高;單細(xì)胞凝膠電泳檢測細(xì)胞DNA變化，通過DNA彗星實驗薏仁多糖可延長尾距，表明DNA斷裂破碎。
　　該實驗提取的薏仁多糖是一種新的多糖，為首次從薏