低密度脂蛋白誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌樣細胞分化的作用研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(artherosclerosis，As)是許多心腦血管疾病發(fā)生的前期病理基礎(chǔ)。在高脂等因素所致的As發(fā)生過程中，平滑肌細胞增生并合成細胞外基質(zhì)是其重要的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)觀念認為，病變中的平滑肌細胞來源于病變部位的動脈中膜。然而最近研究結(jié)果表明，病灶部位的平滑肌細胞并非完全來自于中膜，骨髓來源的細胞在一定的情況下可以定向分化為平滑肌細胞參與動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。 目的：探討低密度脂蛋白(low density lipo

2、protein，LDL)誘導骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow stromal cells，BMSC)向平滑肌樣細胞分化及 myocardin在其分化過程中的作用。 方法：用差異貼壁法分離純化原代骨髓間充質(zhì)干細胞，在不同濃度血清誘導BMSC分化條件下加以LDL刺激，檢測BMSC分化過程中myocardin及平滑肌細胞表面標志平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)，平滑肌肌球蛋白重鏈(smo

3、oth muscle myosin heavy chain，SM-MHC)以及SM-22α的表達。細胞分為: ①常規(guī)培養(yǎng)組(含低糖-DMEM培養(yǎng)基，10％胎牛血清，3％谷氨酰胺)，②常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組(25mg/L)，③20％FBS培養(yǎng)組，④20％FBS培養(yǎng)+LDL刺激組。②、④組分別在培養(yǎng)24小時、48小時和72小時后加入LDL，各組細胞均培養(yǎng)96小時。免疫細胞化學檢測myocardin、α-SMA及SM-MHC的表達，結(jié)合形態(tài)學

4、鑒定BMSC向平滑肌樣細胞分化的情況；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測 myocardin、α-SMA及SM-22α mRNA的表達。 結(jié)果：光鏡顯示BMSC隨著誘導時間延長逐漸由小圓形、多角形轉(zhuǎn)變?yōu)殚L梭形。免疫細胞化學結(jié)果顯示常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組、20％FBS培養(yǎng)組、20％FBS培養(yǎng)+LDL刺激組分別與常規(guī)培養(yǎng)組相比my

5、ocardin、α-SMA及SM-MHC蛋白的表達增強，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，n=9)；同種濃度血清培養(yǎng)，LDL作用48小時上述三種蛋白的表達最強；相同LDL作用時間點，20％FBS培養(yǎng)+LDL剌激組與常規(guī)培養(yǎng)+LDL剌激組相比上述三種蛋白的表達明顯增強，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，n=9)；α-SMA、SM-MHC蛋白的表達與myocardin表達呈正相關(guān)(r=0.9018，P<0.05；r=0.7969，P<0.05)

6、。RT-PCR結(jié)果顯示常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組、20％FBS培養(yǎng)組、20％FBS培養(yǎng)+LDL刺激組分別與常規(guī)培養(yǎng)組相比myocardin、α-SMA及SM-22α mRNA表達增強，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，n=9)；同種濃度血清培養(yǎng)，LDL作用48小時myocardin、α-SMA及SM-22α mRNA的表達最強；相同LDL作用時間點，20％FBS 培養(yǎng)+LDL刺激組與常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組相比myocardin、α-SMA及S