浙江省臺(tái)州地區(qū)耐藥HIV-1感染的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、第一部分:臺(tái)州地區(qū)原發(fā)性耐藥HIV-1毒株流行率及基因變異研究
　　背景: 高效聯(lián)合抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)的廣泛應(yīng)用大大降低了HIV/AIDS患者的發(fā)病率和死亡率，患者生存質(zhì)量得到顯著改善，但隨之產(chǎn)生的病毒耐藥性，已成為抗病毒治療失敗的主要原因。HIV基因型耐藥性檢測(cè)方法是檢測(cè)病毒耐藥情況，進(jìn)而指導(dǎo)臨床治療及治療失敗后更換治療方案的重要技術(shù)手段。
　　目的: 通過(guò)對(duì)臺(tái)州地區(qū)HIV/AIDS患者的原發(fā)性耐藥研究，了解該

2、地區(qū)未經(jīng)抗病毒治療的HIV/AIDS患者原發(fā)性耐藥毒株流行情況，掌握蛋白酶和逆轉(zhuǎn)錄酶基因耐藥性突變發(fā)生的類型、頻率和臨床意義以及系統(tǒng)發(fā)生情況，為更有效地開(kāi)展高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療提供參考。
　　方法: 采集臺(tái)州地區(qū)未經(jīng)抗病毒治療的HIV/AIDS患者的抗凝全血，分離血漿。采用基因型耐藥檢測(cè)方法，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse TranscriptionPolymerase Chain Reaction，RT-PCR)擴(kuò)增HI

3、V-1 pol區(qū)的蛋白酶基因全序列與逆轉(zhuǎn)錄酶基因部分序列。序列測(cè)定結(jié)果提交至美國(guó)斯坦福大學(xué)HIV耐藥數(shù)據(jù)庫(kù)http://hivdb.stanford.edu進(jìn)行耐藥突變分析;登陸Web站點(diǎn)http://www.hiv.lanl.gov初步判定亞型，使用MEGA5.1軟件進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)生分析。
　　結(jié)果: 共獲得453例HIV-1分離株的pol基因序列，經(jīng)基因型耐藥檢測(cè)發(fā)現(xiàn)12例患者出現(xiàn)耐藥，耐藥發(fā)生率為2.6％;此外，另有22例患者存

4、在潛在耐藥。蛋白酶抑制劑耐藥率為0.9％(4/453)，主要耐藥突變包括M46I、V82A和L90M;核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑耐藥率為1.5％(7/453)，耐藥基因突變包括A62V、T69N、M184V和T215S;非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑耐藥率為0.7％(3/56)，耐藥基因突變包括K103N、Y188I和G190A。亞型分析表明，臺(tái)州地區(qū)HIV-1毒株主要分布在6個(gè)不同亞型，53.4％(242/453)為CRF01_AE亞型，19.9％

5、(90/453)為CRF07_BC亞型、12.6％(57/453)為B/B'亞型和11.9％(54/453)為CRF08_BC亞型，C亞型9例，A1亞型1例。
　　結(jié)論: 浙江省臺(tái)州地區(qū)未經(jīng)抗病毒治療的HIV/AIDS患者原發(fā)性耐藥情況仍處于低水平的流行狀態(tài)，患者對(duì)現(xiàn)有的抗病毒藥物敏感。應(yīng)盡快開(kāi)展對(duì)于HIV耐藥基因突變的研究，定期進(jìn)行HIV耐藥性監(jiān)測(cè)，注意未經(jīng)抗病毒治療的HIV/AIDS患者原發(fā)性耐藥株的流行與傳播，及時(shí)合理采取治

6、療方案。
　　第二部分:臺(tái)州地區(qū)HIV-1耐藥毒株在艾滋病抗病毒治療人群中的流行及演變
　　背景: 高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)以其良好的病毒抑制效果，作為治療艾滋病的最主要手段被廣泛應(yīng)用。在抗病毒藥物的選擇壓力下，耐藥性病毒株迅速產(chǎn)生，嚴(yán)重影響抗病毒治療效果。盡管我國(guó)已經(jīng)開(kāi)展了多次HIV耐藥的橫斷面研究，但是隊(duì)列研究不多。
　　目的: 通過(guò)對(duì)臺(tái)州地區(qū)接受抗病毒治療的HIV/AIDS患者進(jìn)行隨訪研究，了解臺(tái)州地區(qū)

7、艾滋病患者抗病毒治療后耐藥發(fā)生情況和水平，探索繼發(fā)性耐藥的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，了解耐藥性HIV-1毒株的分子進(jìn)化特征，豐富對(duì)耐藥相關(guān)突變的認(rèn)識(shí)，為提高艾滋病抗病毒治療效果奠定基礎(chǔ)。
　　方法: 隊(duì)列研究對(duì)象為浙江省臺(tái)州市2008年1月至2011年12月期間開(kāi)始接受抗病毒治療的HIV/AIDS患者，定期進(jìn)行CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和病毒載量檢測(cè)。對(duì)病毒載量＞1000copies/ml的樣本在其治療前、治療后6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月

8、、24個(gè)月、36個(gè)月直至最后一次的血樣采集，進(jìn)行基因型耐藥檢測(cè)，分析不同時(shí)間點(diǎn)耐藥突變發(fā)生和演變情況。
　　結(jié)果: 247例抗病毒治療的HIV/AIDS患者中33人(13.4％)在隨訪期間出現(xiàn)病毒載量大于1000copies/ml，其中19例出現(xiàn)繼發(fā)性耐藥，總耐藥率為7.7％(19/247)，HIV病毒載量大于1000copies/ml的患者中發(fā)生耐藥的比例為57.6％(19/33)。針對(duì)NRTIs和NNRTIs的耐藥率分別達(dá)到5

9、.7％(14/247)和7.3％(18/247)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)針對(duì)PIs的耐藥。患者發(fā)生耐藥突變的時(shí)間中位數(shù)是4.5個(gè)月，針對(duì)NRTIs耐藥的發(fā)生時(shí)間中位數(shù)為7.5個(gè)月，針對(duì)NNRTIs耐藥的發(fā)生時(shí)間中位數(shù)為4.5個(gè)月。NRTIs耐藥突變中M184I/V出現(xiàn)頻率最高為42.4％(14/33)，其次是T215Y/F為24.2％(8/33); NNRTIs耐藥突變中K103N、Y181C、G190A出現(xiàn)最多，分別為24.2％(8/33),21.