重慶地區(qū)HIV陰性免疫力低下患者肺孢子感染分子流行病學(xué)初步研究.pdf

1、目的:這項研究的目的是通過檢測重慶地區(qū)人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)陰性、免疫力低下患者痰液中的肺孢子（Pneumocystis carinii，PC）來探討該類患者PC的感染率;通過比較不同檢測方法對PC的檢測效率，從而探討實時熒光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，r-PCR）在臨床上對HIV陰性免疫力低下患者合并肺孢子肺炎

2、(Pneumocystis carinii pneumonia，PCP)的診斷價值;通過對PC內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(Internal transcribed spacer，ITS)基因進(jìn)行序列分析來對重慶地區(qū)PC的基因多態(tài)性進(jìn)行初步分析。
　　方法:收集重慶地區(qū)71例HIV陰性免疫力低下患者的痰液標(biāo)本，其中結(jié)締組織疾病患者23例，腫瘤放化療患者21例，血液系統(tǒng)疾病患者15例，肝移植術(shù)后患者7例，腎移植術(shù)后患者5例。以ITS基因為目的基因，

3、分別運(yùn)用六亞甲基四胺銀(Gomort methenamine silver stain，GMS)染色法、巢式PCR法和r-PCR法檢測標(biāo)本中的PC，將兩種PCR法檢測均為陽性的標(biāo)本的PCR產(chǎn)物送予基因序列測定，然后進(jìn)行PCITS基因多態(tài)性分析。
　　結(jié)果:(1)71名患者中，痰液標(biāo)本經(jīng)GMS染色后，僅有2例結(jié)果為陽性，經(jīng)巢式PCR檢測后，25例結(jié)果為陽性，巢式PCR的檢出率顯著高于GMS染色法;PC感染率為35.21％，其中腫瘤放

4、化療后患者、血液系統(tǒng)疾病患者、腎移植患者、肝移植患者、結(jié)締組織疾病患者感染率分別為33.33％、26.67％、40.00％、42.86％、39.13％，各病例組間感染率差異無顯著性，但本組病例PC感染率顯著高于同期國外報道，感染率同2009年國內(nèi)報道值接近。(2)根據(jù)臨床PCP診斷結(jié)果，巢式PCR假陽性率較高為36.00％，其特異度為83.01％，靈敏度為88.89％，陽性預(yù)測值為64.00％，當(dāng)用103copes/ml為判斷r-PCR

5、結(jié)果陰陽性的閾值時，r-PCR的靈敏度(83.33％)同巢式PCR無顯著差異性，但它的特異度(98.11％)和陽性預(yù)測值(93.75％)均顯著高于巢式PCR;臨床診斷PCP患者中r-PCR檢測出PC的基因載量顯著高于非臨床診斷PCP患者。(3)通過對15例陽性標(biāo)本的PCR反應(yīng)物進(jìn)行測序，獲得15條ITS序列，其中ITS1共獲得了4個基因型(B，M，E，K)和11條新序列，獲得了ITS2的3個基因型(g，i，b)和12條新序列，5.8Sr

6、RNA得到了7條新序列，經(jīng)過組合，得到了1個已知的ITS基因型(Bi)和14個新組合序列，而所有新序列與國外報道的原型比較，存在6～21個堿基差異，差異主要表現(xiàn)為堿基缺失和堿基替換。
　　結(jié)論:重慶地區(qū)HIV陰性免疫力低下患者群PC感染率較高，臨床醫(yī)師應(yīng)增強(qiáng)對該類患者是否合并PC感染的警覺性;在HIV陰性免疫力低下患者中，使用痰液為標(biāo)本時，r-PCR比巢式PCR更有助于準(zhǔn)確而快速地診斷PCP，并且可以區(qū)分PC定植與感染從而指導(dǎo)臨床