姜黃素對(duì)肝細(xì)胞LDLR表達(dá)作用的分子機(jī)理研究.pdf

1、血液中膽固醇特別是LDL-C濃度的升高是引起動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的最主要危險(xiǎn)因素，降低血液膽固醇濃度可明顯減少冠心病的發(fā)病率和死亡率。體內(nèi)大部分膽固醇結(jié)合于LDL，經(jīng)肝細(xì)胞表面的LDLR代謝和清除。LDLR是位于細(xì)胞表面的跨膜受體，其表達(dá)受到膽固醇和其它許多物質(zhì)在轉(zhuǎn)錄水平或轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控，上調(diào)肝臟LDLR的表達(dá)是降低血液膽固醇濃度的最主要手段。目前臨床應(yīng)用最廣泛的能上調(diào)肝臟LDLR表達(dá)的藥物是他汀類，他汀類藥物能競(jìng)爭(zhēng)性抑制HMG-Co

2、A還原酶的活性，使細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少?？傮w來(lái)講他汀類具有出色的降膽固醇療效，但是也有部分患者因不良反應(yīng)(如肝功能損害等)不能耐受其治療。因此，篩選新型降膽固醇藥物一直是調(diào)血脂藥物的研究重點(diǎn)。 目的： 通過(guò)對(duì)傳統(tǒng)中草藥物的篩選，我們發(fā)現(xiàn)從活血化瘀藥姜黃中提取的姜黃素能顯著降低血清膽固醇、LDL-C含量的作用，從而起到降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。為了研究姜黃素降膽固醇作用的分子機(jī)制，我們?cè)O(shè)計(jì)了一系列實(shí)驗(yàn)。本課題就是在以往

3、研究的基礎(chǔ)上，擬從基因表達(dá)水平和細(xì)胞信號(hào)調(diào)控角度探尋姜黃素與信號(hào)調(diào)控途徑中關(guān)鍵蛋白分子以及基因調(diào)控元件間的相互作用關(guān)系，從而闡明姜黃素對(duì)LDLR表達(dá)影響的機(jī)理。 方法： 第一部分姜黃素誘導(dǎo)LDLR表達(dá)的藥效研究首先利用人肝HepG2細(xì)胞作為L(zhǎng)DLR基因表達(dá)檢測(cè)系統(tǒng)，經(jīng)姜黃素干預(yù)培養(yǎng)后，利用Western-Blot、Rt-PCR、熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀等技術(shù)分析肝細(xì)胞內(nèi)源性L,Dll，R蛋白的表達(dá)量及其表達(dá)活性，確定姜黃素

4、對(duì)LDLR基因表達(dá)的影響，從受體蛋白水平闡明姜黃素降膽固醇作用的機(jī)理。 第二部分姜黃素誘導(dǎo)LDLR表達(dá)的機(jī)理研究： ①將綠色熒光蛋白GFP報(bào)告基因構(gòu)建在調(diào)控低密度脂蛋白受體基因表達(dá)的固醇調(diào)控元件SRE-1的下游，經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)法導(dǎo)入HepG2細(xì)胞，建立LDLR基因表達(dá)的固醇調(diào)控報(bào)告系統(tǒng)及其穩(wěn)定細(xì)胞株HepG2-SRE-GFP，通過(guò)姜黃素的干預(yù)培養(yǎng)，從基因表達(dá)調(diào)控水平研究姜黃素對(duì)啟動(dòng)子SRE-1的影響，探尋姜黃素的作用機(jī)理。

5、 ②利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將 pCMV-Insig2 導(dǎo)入 HepG2 細(xì)胞，建立穩(wěn)定的細(xì)胞株HepG2/Insig2，通過(guò)姜黃素的干預(yù)培養(yǎng)，研究姜黃素對(duì)Insig-2的影響，從信號(hào)調(diào)控通路水平探尋姜黃素降膽固醇作用可能的分子或基因靶點(diǎn)。 結(jié)果： 第一部分研究表明，①姜黃素能夠增強(qiáng)HepG2 LDLR對(duì) LDL 的攝取，具有明顯的時(shí)間依賴性和劑量依賴性。并且在25gmol/L，和作用24小時(shí)的時(shí)候LDLR的活性最強(qiáng)。②

6、姜黃素能夠顯著促進(jìn)HepG2 LDLR的表達(dá)量，具有明顯的時(shí)間依賴性和劑量依賴性。③姜黃素可能通過(guò)促進(jìn)HepG2 LDLR mRNA的轉(zhuǎn)錄上調(diào)LDLR的表達(dá)。 第二部分研究結(jié)果表明，①姜黃素能夠激活啟動(dòng)子調(diào)控元件SRE-1上調(diào)LDLR表達(dá)。②一定濃度的姜黃素能夠通過(guò)逆轉(zhuǎn)受Insig2抑制的SREBP通路，上調(diào)LDLR的表達(dá)。結(jié)論： 綜上所述，我們從受體水平、基因表達(dá)水平到信號(hào)調(diào)控通路水平對(duì)姜黃素降膽固醇的機(jī)理進(jìn)行了一系列