耐藥上皮性卵巢癌細(xì)胞株(TOV112D-DDP)的Her2表達(dá)及其相關(guān)信號(hào)通路分析.pdf

1、目的：利用順鉑（cisplatin，DDP）構(gòu)建順鉑耐藥上皮性卵巢癌細(xì)胞株TOV112D/DDP，并通過蛋白免疫印跡和免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測該耐藥癌細(xì)胞人表皮生長因子受體Her2（human epidermal growth factor receptor2）的表達(dá)情況和相關(guān)信號(hào)通路中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子-3（signal transducers and transcription activators3，STAT-3）的激活情況。

2、探討上皮性卵巢癌細(xì)胞的耐藥性與Her2基因表達(dá)及其相關(guān)信號(hào)通路激活的關(guān)系。為臨床耐藥性卵巢癌的治療奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：1.順鉑耐藥細(xì)胞的構(gòu)建：采用微量遞增的方法，利用順鉑構(gòu)建順鉑耐藥上皮性卵巢癌細(xì)胞株（TOV112D/DDP）；2.順鉑耐藥細(xì)胞耐藥性的評(píng)價(jià)：MTT實(shí)驗(yàn)檢測耐藥細(xì)胞株半數(shù)抑制率（half maximal inhibitory concentration of a substance，IC50），評(píng)價(jià)耐藥細(xì)胞株的

3、耐藥性；3.順鉑耐藥細(xì)胞中Her2的表達(dá)：利用蛋白免疫印跡（Western blot）和細(xì)胞免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)（激光共聚焦掃描顯微鏡）檢測上皮性卵巢癌細(xì)胞株 TOV112D及順鉑耐藥細(xì)胞株 TOV112D/DDP中Her2的表達(dá)；4.順鉑耐藥細(xì)胞 TOV112D/DDP中 STAT3的表達(dá)和激活情況：利用Western blot和激光共聚焦掃描顯微鏡檢測上皮性卵巢癌細(xì)胞株TOV112D及順鉑耐藥細(xì)胞株TOV112D/DDP中STAT3

4、、p-STAT3的表達(dá)水平及分布情況。
　　結(jié)果：1.成功構(gòu)建順鉑耐藥上皮性卵巢癌細(xì)胞 TOV112D/DDP，MTT檢測結(jié)果得到TOV112D/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥系數(shù)為4.1429；2.Western blot檢測結(jié)果顯示，與上皮性卵巢癌細(xì)胞TOV112D相比，耐藥細(xì)胞TOV112D/DDP Her2表達(dá)明顯上調(diào)，激光共聚焦掃描顯微鏡結(jié)果同樣顯示耐藥細(xì)胞Her2的表達(dá)明顯高于非耐藥細(xì)胞。3.Western blot結(jié)果顯示，

5、與TOV112D細(xì)胞相比，耐藥細(xì)胞TOV112D/DDP中stat3表達(dá)明顯上調(diào)。激光共聚焦掃描顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)，順鉑耐藥細(xì)胞TOV112D/DDP中的STAT3較上皮性卵巢癌細(xì)胞TOV112D中顯著上調(diào)，且順鉑耐藥細(xì)胞的細(xì)胞核中STAT3表達(dá)上調(diào)尤為顯著。4.激光共聚焦掃描顯微鏡檢測結(jié)果顯示，p-STAT3均主要表達(dá)于TOV112D和順鉑耐藥細(xì)胞TOV112D/DDP的細(xì)胞核中，Western blot和激光共聚焦掃描顯微鏡結(jié)果均表明T