熱休克法制備高效樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗治療小鼠乳腺癌.pdf

1、目錄中文摘要1英文摘要4符號(hào)說明一7—1￡_一刖吾8材料與方法9結(jié)果14討論16結(jié)侖23附圖。24參考文獻(xiàn)28綜述32致謝”j一45原創(chuàng)性聲明462分別利用熱休克和凍融法處理小鼠EMT6乳腺癌細(xì)胞，研究所獲得的乳腺癌細(xì)胞裂解物當(dāng)中熱休克蛋白70(HotShockProtein70，HSP70)的表達(dá)情況。3將獲得全細(xì)胞抗原與培養(yǎng)的樹突狀細(xì)胞混合培養(yǎng)，制備小鼠樹突狀細(xì)胞乳腺癌腫瘤疫苗。分別利用以上制備的不同的小鼠乳腺癌樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗治

2、療小鼠移植瘤，對(duì)比熱休克法和凍融法制備的小鼠乳腺癌樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗對(duì)荷瘤小鼠的療效。42l天時(shí)處死小鼠，稱量小鼠腫瘤體積及質(zhì)量，并取血比較不同治療組小鼠血清中細(xì)胞因子(cytokine)干擾素吖(Interferon1，INF7)、白細(xì)胞介素一2(Interleukin2，IL2)和白細(xì)胞介素一12(P70)(Interleukin一12，IL一12(P70))的水平。方法I1定期通過光學(xué)顯微鏡觀察培養(yǎng)的樹突狀細(xì)胞的形念，利用流式細(xì)胞

3、儀對(duì)樹突狀細(xì)胞的表型進(jìn)行分析。2用免疫組織化學(xué)法(immunohistochemicalmethod)檢測(cè)不同方法制備的小鼠乳腺癌腫瘤細(xì)胞中HSP70的表達(dá)量的不同。3建立小鼠乳腺癌動(dòng)物模型并分組，應(yīng)用不同的樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗進(jìn)行治療。4至21天，，處死小鼠，稱量小鼠腫瘤體積和質(zhì)量，并取血利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)法測(cè)定各組小鼠血清中細(xì)胞因子INF丫、IL一2、IL1

4、2(P70)的水平。結(jié)果L通過對(duì)骨髓源性樹突狀細(xì)胞形態(tài)的觀察及流式細(xì)胞儀(flowcytometry)對(duì)細(xì)胞表面表型分析，利用GM—CSF、IL4和TNF—a聯(lián)合培養(yǎng)的小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞為典型的成熟樹突狀細(xì)胞。2經(jīng)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，熱休克法制備的小鼠EMT6乳腺癌細(xì)胞裂解物中HSP70的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于凍融法制備的小鼠EMT6乳腺癌細(xì)胞裂解物中HSP70的表達(dá)量。3與凍融法疫苗治療組小鼠腫瘤相比較，熱休克法疫苗治療組小鼠的腫瘤質(zhì)量