大鼠雙下肢伸直襁褓體位下的髖關(guān)節(jié)脫位病理演變的組織學(xué)觀察.pdf

1、發(fā)育性髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良（DDH）是指因某種因素導(dǎo)致患兒出生時(shí)或者在發(fā)育過程中髖臼陡淺甚至股骨頭脫出髖臼之外的病理現(xiàn)象，描述嬰兒及兒童先天性或發(fā)育性髖關(guān)節(jié)解剖結(jié)構(gòu)異常的統(tǒng)稱。DDH包括髖關(guān)節(jié)不穩(wěn)定、半脫位、脫位和髖臼發(fā)育不良。DDH的病因及發(fā)病機(jī)制至今不明，除先天因素外，生后體位因素，肌力失衡、關(guān)節(jié)囊松弛等起重要作用。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)擬通過人為改變出生后體位即雙下肢伸直襁褓體位來研究該體位下髖臼關(guān)節(jié)軟骨的病理組織學(xué)演變。髖臼軟骨復(fù)合

2、體在發(fā)育過程中鈣鹽沉積骨化從而形成骨性髖臼，所以在此過程中，髖臼軟骨復(fù)合體的形態(tài)及發(fā)育改變直接影響髖臼的最終形態(tài)。髖臼軟骨復(fù)合體的正常生長(zhǎng)發(fā)育通過軟骨細(xì)胞不斷增殖和凋亡的結(jié)果，應(yīng)用免疫組化方法研究雙下肢伸直襁褓體位下新生幼鼠髖臼軟骨形態(tài)及細(xì)胞的成熟、增殖和凋亡情況，以研究髖臼發(fā)育不良與髖臼軟骨復(fù)合體的細(xì)胞成熟、增殖及凋亡表達(dá)情況之間的關(guān)系。
　　方法：制作大鼠下肢伸直襁褓體位及研究該體位下大鼠髖臼的病理組織學(xué)演變
　　1.下

3、肢伸直襁褓體位大鼠模型制作。
　　1.1 Wistar新生幼鼠6窩（每窩12只，雌雄各半）
　　1.2試劑：Brdu原液，Abcam公司提供。
　　1.3模型制作：剛出生即新生幼鼠1號(hào)窩隨機(jī)取3只雌鼠、3只雄鼠進(jìn)行編號(hào)，抽取的鼠雙腿、雙髖關(guān)節(jié)處醫(yī)用膠帶纏繞固定，呈髖關(guān)節(jié)內(nèi)收伸直、雙下肢并攏位，并固定尾部活動(dòng)，膝關(guān)節(jié)可活動(dòng)，其余幼鼠做對(duì)照，不作處理。每日下午松解固定膠帶一次，松解半小時(shí)后重新固定。所有幼鼠均由母鼠母乳同時(shí)

4、喂養(yǎng)，籠內(nèi)自由活動(dòng)。1號(hào)窩分別于3，6，9天后處死所有實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組幼鼠，進(jìn)行取材，制作石蠟標(biāo)本。處死前2小時(shí)，行腹腔內(nèi)注射Brdu原液，濃度10mg/ml。
　　1.42號(hào)窩新生幼鼠同法處理，處死前2小時(shí)，腹腔內(nèi)注射 Brdu原液，濃度10mg/ml。
　　1.5以上各組每組各12例髖關(guān)節(jié)。
　　2.動(dòng)物髖臼組織學(xué)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
　　2.1制作髖臼軟骨復(fù)合體整體組織石蠟切片(冠狀面，附帶少量骨組織，充分展示

5、其三維立體結(jié)構(gòu))，部分上述切片使用番紅O-快綠方法染色，觀察各組髖臼大體形態(tài)學(xué)變化。
　　2.2免疫組化顯示軟骨細(xì)胞中pthrp（甲狀旁腺相關(guān)肽）在髖臼軟骨復(fù)合體中的變化。
　　2.3免疫組化顯示各區(qū)骺板內(nèi)Brdu標(biāo)記的處于有絲分裂期軟骨細(xì)胞的分布.，應(yīng)用tunel法檢測(cè)雙下肢伸直襁褓體位下骺板軟骨細(xì)胞的凋亡。
　　結(jié)果：雙下肢伸直襁褓體位下大鼠模型形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果
　　下肢伸直襁褓體位動(dòng)物模型下大鼠髖臼生長(zhǎng)發(fā)育發(fā)

6、生改變，實(shí)驗(yàn)組髖臼與對(duì)照組髖臼相比外形上發(fā)生顯著改變，實(shí)驗(yàn)組有假臼形成，且實(shí)驗(yàn)組髖臼與對(duì)照組髖臼相比邊緣不整，變淺變薄。番紅O-快綠染色觀察實(shí)驗(yàn)組髖臼軟骨與對(duì)照組相比各支寬度增加，細(xì)胞排列紊亂，粗糙。
　　雙下肢伸直襁褓體位下大鼠髖臼軟骨細(xì)胞pthrp（甲狀旁腺相關(guān)肽）的表達(dá)結(jié)果實(shí)驗(yàn)組pthrp陽性細(xì)胞表達(dá)于髖臼軟骨復(fù)合體的髂骨支、恥骨支、坐骨各支肥大區(qū)，但比對(duì)照組高（p<0.01），pthrp陽性細(xì)胞數(shù)3天組>6天組>9天組。雙

7、下肢伸直襁褓體位下brdu標(biāo)識(shí)大鼠髖臼軟骨細(xì)胞增殖及大鼠髖臼軟骨細(xì)胞凋亡的結(jié)果
　　Brdu:對(duì)照組髖臼軟骨恥骨支、髂恥骨側(cè)、坐骨支增殖區(qū)陽性細(xì)胞表達(dá)明顯高于實(shí)驗(yàn)組（p<0.01）。實(shí)驗(yàn)組的髖臼軟骨恥骨支、髂恥骨側(cè)增殖區(qū)陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)3天組<6天組<9天組。
　　凋亡：實(shí)驗(yàn)組髖臼軟骨復(fù)合體肥大區(qū)凋亡細(xì)胞較對(duì)照組明顯減少，增殖區(qū)和靜止區(qū)凋亡實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯增多（p<0.01）。實(shí)驗(yàn)組的髖臼軟骨復(fù)合體增殖區(qū)和肥大區(qū)凋亡細(xì)胞個(gè)數(shù)3