循環(huán)抗原和血清抗體的聯(lián)合檢測(cè)及蛋白質(zhì)組分析用于日本血吸蟲(chóng)病診斷的初步研究.pdf

1、目的:探討日本血吸蟲(chóng)信號(hào)蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在血吸蟲(chóng)病免疫診斷中的價(jià)值。 方法:利用血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)培養(yǎng)物進(jìn)行Sj14-3-3和血吸蟲(chóng)循環(huán)抗原成分關(guān)聯(lián)的驗(yàn)證，制備并純化重組Sj14-3-3(rSj-4-3-3)的單克隆抗體和單特異性多克隆抗體，并以此建立雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(sandwich-ELISA)；以純化的rSj14-3-3建立間接ELISA，比較用于急、慢性血吸蟲(chóng)病診斷的特異性和敏感性。 結(jié)果:

2、免疫印跡(Western blotting)顯示，Sj14-3-3是血吸蟲(chóng)循環(huán)抗原的主要組分之一。sandwich-ELISA，間接ELISA和聯(lián)合檢測(cè)三種方法檢測(cè)急性患者血清70例，敏感性分別為72.9％，75.7％和91.4％；檢測(cè)慢性患者血清110例，敏感性為分別為46.4％，61.8％和82.7％；檢測(cè)正常人血清100例，特異性為分別為96％，92％和92％；吡喹酮?dú)⑾x(chóng)治療后的患者血清161份，其中急性感染治療后1年以內(nèi)轉(zhuǎn)陰率分

3、別為50％，38.9％和33.3％；慢性治療后1年內(nèi)分別是76.4％，55.6％和43.1％；慢性治療后2年以上分別為93.0％，83.0％和78.9％。3種方法檢測(cè)華支睪吸蟲(chóng)的交叉反應(yīng)性分別為0％，15.6％和15.6％；對(duì)于鉤蟲(chóng)的交叉反應(yīng)為8.7％、19.6％和21.7％。3種方法的敏感性、與華支睪吸蟲(chóng)感染者血清、鉤蟲(chóng)感染者血清交叉反應(yīng)、慢性治療后1年內(nèi)及慢性治療2年以上患者血清的轉(zhuǎn)陰率具有顯著性差異(P<0.05)；而特異性及其他

4、化療后患者血清的轉(zhuǎn)陰性差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 結(jié)論:循環(huán)14-3-3抗原和抗體聯(lián)合檢測(cè)在日本血吸蟲(chóng)病免疫診斷中具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值，且可用于臨床治療的療效考核。 方法:尾蚴感染家兔42天后，收集成蟲(chóng)并制備血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)粗抗原，將血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)粗抗原純化進(jìn)行2-DE電泳分離，同時(shí)用血吸蟲(chóng)患者混合血清作為一抗。將2-DE電泳凝膠轉(zhuǎn)NC膜后，用患者血清和對(duì)照正常人血清分別進(jìn)行免疫印跡，得到相應(yīng)的2-DE免疫印跡圖譜，用雙向

5、電泳圖像分析軟件進(jìn)行分析比對(duì)，挑點(diǎn)進(jìn)行液相色譜結(jié)合質(zhì)譜(LD-LC-MS)分析。 結(jié)果:采用PI3-10膠條考馬斯亮藍(lán)染色后，血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)粗抗原2-DE圖譜顯示了198個(gè)蛋白斑點(diǎn)。2-DE免疫印跡結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組圖譜呈現(xiàn)抗原抗體反應(yīng)點(diǎn)，而對(duì)照組為0個(gè)。采用軟件分析后，選出18個(gè)明顯可見(jiàn)點(diǎn)進(jìn)行MS，初步分析有2個(gè)點(diǎn)和血吸蟲(chóng)蛋白質(zhì)庫(kù)匹配較好。 結(jié)論:血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)粗抗原雙向電泳分離后有198個(gè)蛋白斑點(diǎn)。其免疫印跡分析可找到個(gè)特異性