IL-25在小鼠CIA發(fā)病中的變化及作用研究.pdf

1、研究目的：
　　 探討IL-25基因在DBA／1小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用,及其作為類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療靶點(diǎn)的可能性。
　　 研究方法：
　　 (1)根據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn),應(yīng)用雞Ⅱ型膠原誘導(dǎo)DBA／1小鼠,建立膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型,對(duì)病變關(guān)節(jié)行HE染色并根據(jù)病理顯示的炎癥程度進(jìn)行疾病的分期。
　　 (2)構(gòu)建小鼠IL-25標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒,應(yīng)用熒光定量PCR法分析不同發(fā)病時(shí)期小鼠脾臟和局部關(guān)節(jié)滑膜

2、組織中IL-25的表達(dá)情況；ELISA檢測(cè)小鼠不同發(fā)病時(shí)期血清和脾臟細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-25蛋白水平的表達(dá)。
　　 (3)收集各期小鼠關(guān)節(jié)組織、脾臟,應(yīng)用熒光定量PCR法和流式細(xì)胞分析檢測(cè)病變關(guān)節(jié)滑膜及脾臟相關(guān)炎癥因子的表達(dá)水平,并分析這些炎癥因子與IL-25的相關(guān)性。
　　 (4)間接免疫熒光染色,觀(guān)察關(guān)節(jié)局部滑膜炎癥因子IL-4的表達(dá)情況。
　　 (5)熒光定量PCR法檢測(cè)mIL-25作用于DC2.4細(xì)胞系后

3、分泌的細(xì)胞因子的變化。
　　 研究結(jié)果：
　　 (1)成功建立了雞Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的小鼠關(guān)節(jié)炎模型,小鼠關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率為100％,平均發(fā)病時(shí)間為35±5天。并根據(jù)炎癥的嚴(yán)重程度將疾病劃分為發(fā)病早期和發(fā)病高峰期。
　　 (2)構(gòu)建小鼠IL-25標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒,RT-PCR檢測(cè)小鼠脾臟和局部關(guān)節(jié)滑膜組織中IL-25的表達(dá)。結(jié)果顯示:在CIA小鼠發(fā)病早期,IL-25雖有升高,但與正常小鼠相比,并無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而在發(fā)病的高峰

4、期,IL-25持續(xù)上升,顯著高于對(duì)照組和炎癥早期。ELISA檢測(cè)小鼠不同發(fā)病時(shí)期血清和脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-25蛋白水平,結(jié)果顯示:在CIA發(fā)病高峰期,IL-25明顯增強(qiáng)。
　　 (3)RT-PCR以及流式細(xì)胞技術(shù)分析CIA相關(guān)炎癥因子的表達(dá)水平。研究表明:在CIA發(fā)病早期,IL-17明顯高于正常組,而在發(fā)病高峰期卻有下降的趨勢(shì),且在早期與IL-25有明顯的負(fù)相關(guān)；RT-PCR及免疫熒光檢測(cè)發(fā)病整個(gè)過(guò)程中IL-4的表達(dá),IL-4

5、在發(fā)病高峰期明顯增高,并在此期與IL-25呈正相關(guān)；RT-PCR以及流式細(xì)胞技術(shù)分析IFN-γ,發(fā)現(xiàn)在整個(gè)CIA疾病過(guò)程中都處于較高水平,且與IL-25并無(wú)直接的關(guān)系。
　　 (4)RT-PCR檢測(cè)mIL-25重組蛋白對(duì)DC2.4細(xì)胞系所分泌的細(xì)胞因子的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)IL-25作用后,DC2.4所分泌的IL-6,IL-23及TGF-β均下調(diào)。
　　 結(jié)論：
　　 IL-25也稱(chēng)為IL-17E,是IL-17

6、家族成員之一。主要是由Th2類(lèi)細(xì)胞和肥大細(xì)胞產(chǎn)生。與其他家族成員明顯不同的是:IL-25能夠誘導(dǎo)IL-4、IL-5以及IL-13的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠模型來(lái)探討IL-25的表達(dá)及其可能的作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn):IL-25在小鼠CIA的高峰期表達(dá)明顯增高。在疾病早期抑制前炎癥因子IL-17的產(chǎn)生,在后期則誘導(dǎo)IL-4的表達(dá)。提示,IL-25在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展中起著關(guān)鍵性的作用。研究其可能的作用機(jī)制,有助于臨床類(lèi)風(fēng)濕性