IL-25在小鼠CIA發(fā)病中的變化及作用研究.pdf

1、研究目的：
　　 探討IL-25基因在DBA／1小鼠膠原誘導性關節(jié)炎(CIA)發(fā)生發(fā)展過程中的作用,及其作為類風濕性關節(jié)炎治療靶點的可能性。
　　 研究方法：
　　 (1)根據(jù)國內外文獻,應用雞Ⅱ型膠原誘導DBA／1小鼠,建立膠原誘導的關節(jié)炎模型,對病變關節(jié)行HE染色并根據(jù)病理顯示的炎癥程度進行疾病的分期。
　　 (2)構建小鼠IL-25標準質粒,應用熒光定量PCR法分析不同發(fā)病時期小鼠脾臟和局部關節(jié)滑膜

2、組織中IL-25的表達情況；ELISA檢測小鼠不同發(fā)病時期血清和脾臟細胞培養(yǎng)上清中IL-25蛋白水平的表達。
　　 (3)收集各期小鼠關節(jié)組織、脾臟,應用熒光定量PCR法和流式細胞分析檢測病變關節(jié)滑膜及脾臟相關炎癥因子的表達水平,并分析這些炎癥因子與IL-25的相關性。
　　 (4)間接免疫熒光染色,觀察關節(jié)局部滑膜炎癥因子IL-4的表達情況。
　　 (5)熒光定量PCR法檢測mIL-25作用于DC2.4細胞系后

3、分泌的細胞因子的變化。
　　 研究結果：
　　 (1)成功建立了雞Ⅱ型膠原誘導的小鼠關節(jié)炎模型,小鼠關節(jié)炎的發(fā)病率為100％,平均發(fā)病時間為35±5天。并根據(jù)炎癥的嚴重程度將疾病劃分為發(fā)病早期和發(fā)病高峰期。
　　 (2)構建小鼠IL-25標準質粒,RT-PCR檢測小鼠脾臟和局部關節(jié)滑膜組織中IL-25的表達。結果顯示:在CIA小鼠發(fā)病早期,IL-25雖有升高,但與正常小鼠相比,并無明顯的統(tǒng)計學差異。而在發(fā)病的高峰

4、期,IL-25持續(xù)上升,顯著高于對照組和炎癥早期。ELISA檢測小鼠不同發(fā)病時期血清和脾細胞培養(yǎng)上清中IL-25蛋白水平,結果顯示:在CIA發(fā)病高峰期,IL-25明顯增強。
　　 (3)RT-PCR以及流式細胞技術分析CIA相關炎癥因子的表達水平。研究表明:在CIA發(fā)病早期,IL-17明顯高于正常組,而在發(fā)病高峰期卻有下降的趨勢,且在早期與IL-25有明顯的負相關；RT-PCR及免疫熒光檢測發(fā)病整個過程中IL-4的表達,IL-4

5、在發(fā)病高峰期明顯增高,并在此期與IL-25呈正相關；RT-PCR以及流式細胞技術分析IFN-γ,發(fā)現(xiàn)在整個CIA疾病過程中都處于較高水平,且與IL-25并無直接的關系。
　　 (4)RT-PCR檢測mIL-25重組蛋白對DC2.4細胞系所分泌的細胞因子的影響。實驗結果顯示:經(jīng)IL-25作用后,DC2.4所分泌的IL-6,IL-23及TGF-β均下調。
　　 結論：
　　 IL-25也稱為IL-17E,是IL-17

6、家族成員之一。主要是由Th2類細胞和肥大細胞產生。與其他家族成員明顯不同的是:IL-25能夠誘導IL-4、IL-5以及IL-13的表達。本實驗應用膠原誘導性關節(jié)炎小鼠模型來探討IL-25的表達及其可能的作用機制。研究發(fā)現(xiàn):IL-25在小鼠CIA的高峰期表達明顯增高。在疾病早期抑制前炎癥因子IL-17的產生,在后期則誘導IL-4的表達。提示,IL-25在類風濕性關節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展中起著關鍵性的作用。研究其可能的作用機制,有助于臨床類風濕性