乳腺癌前哨淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移術(shù)中診斷技術(shù)的初步研究.pdf

1、背景與目的：免疫磁珠技術(shù)是近年來國內(nèi)外研究的一種新的免疫學(xué)技術(shù),由于具有高特異性、高濃縮性、高分離率,且不影響細(xì)胞活性等特點,與常規(guī)檢測技術(shù)(如RT-PCR、流式細(xì)胞儀等)相結(jié)合,彌補了常規(guī)檢測技術(shù)的不足,改善了這些檢測方法對腫瘤細(xì)胞檢測的敏感性及特異性。免疫磁珠分離在循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測中的應(yīng)用價值已得到了肯定,但其用于乳腺癌前哨淋巴結(jié)活檢(SLNB)術(shù)中診斷國內(nèi)外尚未見報道。
　　 本課題應(yīng)用免疫磁珠分離技術(shù)對早期乳腺癌患者前哨

2、淋巴結(jié)活檢所得到的前哨淋巴結(jié)(SLN)行術(shù)中診斷,與傳統(tǒng)的術(shù)中冰凍HE染色及細(xì)胞角蛋白免疫組化(CK-IHC)法相比,評價其敏感性、特異性、假陰性率等指標(biāo),旨在建立一個新的分子學(xué)診斷模型,為當(dāng)前乳腺癌前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的術(shù)中診斷方法提供新的思路。
　　 研究方法:2009年1月至2009年9月天津市腫瘤醫(yī)院連續(xù)收治的62例女性乳腺癌病人。所有病人均符合2009年NCCN推薦的前哨淋巴結(jié)活檢的條件,于術(shù)中以美藍法行前哨淋巴結(jié)活檢術(shù)。每

3、個病人所得的SLN標(biāo)記后,將每個前哨淋巴結(jié)平均分為A、B、C、D四部分。將對角線的A、D部分行moc-31單抗免疫磁珠分離聯(lián)合流式細(xì)胞分析乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)標(biāo)志物CD44v6、her-2、Mucin-1表達水平,從而診斷SLN的轉(zhuǎn)移情況。而同一淋巴結(jié)的B、D兩部分各取兩張切片行傳統(tǒng)的前哨淋巴結(jié)術(shù)中冰凍HE染色和抗CK7及CKAE1/AE3細(xì)胞角蛋白免疫組化技術(shù)(CK-IHC)診斷SLN的轉(zhuǎn)移情況。比較三種術(shù)中診斷方法對前哨淋巴結(jié)活檢的敏感性

4、、特異性、假陰性率等指標(biāo),并進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.前哨淋巴結(jié)檢出情況:成功確定了62例中52例的SLN,成功率83.9％。52例確定SLN的病例,共檢出SLN89枚。在52例成功實施SLNB的病人均行全腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù),共檢出腋窩非SLN914枚,每例9-51枚,平均為17.6枚,中位淋巴結(jié)數(shù)18枚。其中25例病人腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移,共取得陽性淋巴結(jié)120枚。
　　 2.乳腺癌前哨淋巴結(jié)的HE染

5、色:89枚SLN冰凍切片發(fā)現(xiàn)17例病人24枚SLN發(fā)生轉(zhuǎn)移。在25例腋窩淋巴結(jié)陽性病人中,術(shù)中SLN冰凍切片組8例病人SLN陰性,而伴非SLN的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,假陰性率為32％(8/25)。SLN術(shù)中冰凍HE染色的敏感性為6896(17/25),特異性為100％(17/17)。
　　 3.抗CK7和CKAE1/AE3細(xì)胞角蛋白免疫組化:52例病人取得的89枚SLN中通過抗CK7和CKAE1/AE3細(xì)胞角蛋白免疫組化,其中19例病人2

6、8枚SLN診斷為轉(zhuǎn)移。運用細(xì)胞角蛋白免疫組化染色診斷乳腺癌前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移敏感性為76.0％(19/25),特異性為100.0％(19/19),假陰性率為24％(6/25)。
　　 4.免疫磁珠分離診斷前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:聯(lián)合免疫磁珠分離與流式細(xì)胞分析,發(fā)現(xiàn)24例病人39枚SLN發(fā)生轉(zhuǎn)移。在免疫磁珠分離組,1例SLN陰性,而伴非SLN得淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,假陰性率為4.0％(1/25)。免疫磁珠分離法用于SLNB的敏感性為96％(24/25)

7、,特異性為96.3％(26/27)。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實驗引入免疫磁性分離技術(shù)術(shù)中診斷前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,與傳統(tǒng)的冰凍HE染色及CK-IHC相比,證實免疫磁珠分離能夠快速、準(zhǔn)確地判斷出SLN陽性細(xì)胞,為下一步指導(dǎo)手術(shù)奠定了堅實的基礎(chǔ)。
　　 2.對乳腺癌前哨淋巴結(jié)行傳統(tǒng)的冰凍HE染色發(fā)現(xiàn),在前哨淋巴結(jié)的術(shù)中診斷方面,傳統(tǒng)的冰凍HE染色在臨床上廣泛應(yīng)用的同時卻仍有敏感性低,假陰性率較高等不足。
　　

8、3.本實驗對乳腺癌前哨淋巴結(jié)行抗CK7和CKAE1/AE3細(xì)胞角蛋白免疫組化染色,其敏感性及假陰性率等指標(biāo)較冰凍切片HE染色法具有明顯的優(yōu)勢。在冰凍HE染色的基礎(chǔ)上聯(lián)合CK-IHC分析可以有效的提高SLN檢測的靈敏度及微轉(zhuǎn)移的檢出率,但由于CK-IHC時間較長,故實用性較差。
　　 4.免疫磁珠分離技術(shù)較冰凍切片和細(xì)胞角蛋白免疫組化技術(shù)在乳腺癌前哨淋巴結(jié)活檢中,在敏感性和假陰性率等指標(biāo)上具有明顯的優(yōu)勢,其結(jié)果的穩(wěn)定性有待更大樣本