妊娠早期單核細胞異質(zhì)性分析及滋養(yǎng)層細胞系HTR8-SVneo對其影響的研究.pdf

1、母體對植入胚胎免疫耐受的同時抵抗病原體（病毒，細菌）感染是成功妊娠的關(guān)鍵。機體維持母胎間的免疫耐受并有效抵御病原體感染包含大量復(fù)雜、彼此相關(guān)聯(lián)的事件，受到嚴格的時空調(diào)控。母胎間免疫耐受的不足往往導(dǎo)致病理性妊娠如先兆子癇、習(xí)慣性流產(chǎn)等疾病的發(fā)生；然而過度耐受又會導(dǎo)致無法有效抵御病原體感染，因此維持理想的耐受-抗感染平衡對于妊娠的順利進行至關(guān)重要。已知母胎界面存在的眾多免疫細胞參與母胎免疫耐受及抗感染，單核細胞作為該部位第二大免疫細胞群體在

2、此過程中發(fā)揮重要作用。單核細胞是一類具有高度異質(zhì)性的細胞群體，主要分為CD14+CD16－單核亞群以及CD14+CD16+單核亞群。已有的報道指出，CD14+CD16+單核亞群具有高度的免疫抑制功能有利于維持局部免疫耐受；與之相反，CD14+CD16－單核亞群則能有效啟動機體的免疫應(yīng)答從而抵御潛在的外部感染。因此，對妊娠過程中母體外周血以及蛻膜組織局部單核異質(zhì)性的研究有助于更好的理解病理性妊娠并對相關(guān)疾病的防治提供新的思路。滋養(yǎng)層作為胚

3、胎最初與母體接觸的組織，在胚胎與母體子宮內(nèi)膜間有效的交流過程中必不可少，因此滋養(yǎng)層與母體免疫系統(tǒng)間的相互作用備受關(guān)注。然而，有關(guān)滋養(yǎng)層細胞對蛻膜局部單核細胞作用的相關(guān)研究尚未見報道。基于此，本研究利用滋養(yǎng)層細胞系HTR8-SVeno細胞作為滋養(yǎng)層細胞模型，觀察分析體外模擬妊娠早期條件下HTR8-SVeno細胞對于人外周血來源單核細胞各亞群分布的調(diào)節(jié)，以及模擬妊娠早期病原體感染(LPS)條件下HTR8-SVeno細胞對于單核細胞各亞群再分

4、布的調(diào)節(jié)。
　　 1．目的
　　 觀察正常早孕人外周血以及蛻膜組織局部單核細胞各亞群分布比例。體外模擬母胎界面微環(huán)境，檢測滋養(yǎng)層細胞系HTR8-SVneo細胞對單核細胞各亞群分布的調(diào)控及病原體感染(LPS)條件下HTR8-SVeno細胞對于單核細胞各亞群再分布的調(diào)節(jié)。揭示胚胎組織參與調(diào)控母胎間免疫耐受，為滋養(yǎng)層與母胎間免疫微環(huán)境的關(guān)系提供理論依據(jù)，從而有利于病理性妊娠發(fā)病與治療的認識。
　　 2．方法
　　

5、 2.1流式細胞術(shù)檢測年齡為20～35歲的早孕婦女(19例)與健康未孕者(13例)外周單核細胞CD14+CD16－亞群以及CD14+CD1礦亞群分布比例；
　　 2.2流式細胞術(shù)檢測健康婦女妊娠早期蛻膜組織(6例)單核細胞單核細胞CD14+CD16－亞群以及CD14+CD16+亞群分布比例；
　　 2.3流式細胞術(shù)檢測體外培養(yǎng)時間(4h、8h、12h)對人外周血單核細胞CD14+CD16－亞群以及CD14+CD16+亞

6、群分布的影響；
　　 2.4流式細胞術(shù)檢測HTR8-SVneo滋養(yǎng)細胞與單核細胞等比例共培養(yǎng)4h、8h、12h對單核細胞CD14+CD16－亞群以及CD14+CD16+亞群分布的影響；
　　 2.5流式細胞術(shù)檢測LPS(100ng/mL)對單核細胞（單獨培養(yǎng)組）各亞群分布的影響、對HTR8-SVneo細胞誘導(dǎo)的單核細胞（單核細胞與HTR8共培養(yǎng)組）各亞群分布的影響。
　　 3.1健康未孕者外周血單核細胞以CD14

7、+CD16－亞群為主要群體，其陽性頻率為（88.34±3.73）％，CD14+CD16+亞群僅為（11.5Q士3.7）％；與健康未孕女性外周血比較，早孕婦女外周血單核細胞CD14+CD16－亞群顯著上升，（陽性頻率為(91.79±7.59)％，P＜0.01)，CD14+CD16+亞群單核細胞亞群比例顯著降低（陽性頻率為（8.21士4.73）％，P＜0.05)。
　　 3.2妊娠早期，CD14+CD16+細胞亞群是蛻膜組織中CD1

8、4+細胞的主要亞群，其陽性頻率為（69.13±7.73）％，而早孕婦女外周血中CD14+CD16+細胞亞群僅為（8.21±4.73）％，二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）：CD14+CD16－亞群約占蛻膜組織中CD14+細胞的（32.5±5.65）％，顯著低于早孕婦女外周血的陽性頻率(91.79±7.59)％，P＜0.05。
　　 3.3利用磁分選技術(shù)獲取的人外周血單核細胞在體外分別培養(yǎng)4h、8h、12h后，CD14+CD

9、16+亞群分別占總單核細胞的（8.31士0.22）％、（8.28士0.34）％、(8.26±:0.12)％，三者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。由此可見，在12小時離體培養(yǎng)過程中單核細胞各亞群比例無顯著變化。
　　 3.4單獨培養(yǎng)單核細胞經(jīng)LPS(100ng/mL)刺激12h后，CD14+CD16+單核細胞亞群比例與無LPS刺激組比較無顯著變化(7.89％ vs7.63％);而HTR8-SVneo滋養(yǎng)細胞與單核細胞共培養(yǎng)組經(jīng)LPS(100

10、ng/mL)刺激后，HTR8-SVneo滋養(yǎng)細胞誘導(dǎo)的CD14+CD16+單核細胞亞群比例上調(diào)受到顯著抑制(16.64％ vs4.54％，P＜0.05)。
　　 4．結(jié)論
　　 4.1妊娠早期外周CD14+CD16+亞群單核細胞比例顯著降低；與之相反，蛻膜組織中該亞群比例卻顯著上升，并成為單核細胞的優(yōu)勢群體；
　　 4.2滋養(yǎng)層細胞系HTR8-SVneo能夠誘導(dǎo)CD14+CD16+亞群單核細胞比例顯著上升，提示體

11、內(nèi)蛻膜組織局部該亞群單核細胞的優(yōu)勢地位可能與滋養(yǎng)層調(diào)控相關(guān)：LPS刺激條件下，HTR8-SVneo誘導(dǎo)的CD14+CD16+亞群單核細胞比例上調(diào)受到顯著抑制。
　　 綜上所述，在早期妊娠過程中，母胎界面存在的CD14+CD16+亞群單核細胞的優(yōu)勢地位有利于母體對胚胎免疫耐受的建立及維持。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，滋養(yǎng)層細胞對該亞群單核細胞優(yōu)勢分布發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用，從而有利于胚胎的順利植入；然而當(dāng)有病原微生物刺激時(LPS)，滋養(yǎng)層又能下